鲫鱼肝细胞分离与原代培养方法的优化.pdf

·2 0 1 1 ，2 6 ( ):2 0 6 -2 12 华北农学报 增刊 鲫鱼肝细胞分离与原代培养方法的优化 1 ，2 2 2 2 1 ，2 1 ，2 ， ， ， ， ， 贾 睿 曹丽萍 丁炜东 杜金梁 徐 跑 殷国俊 (1． ， 214081 ;2 ． ， 南京农业大学无锡渔业学院 江苏无锡 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 ， 214081 ) 农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室 江苏 无锡 : ， 。 摘要 通过不同的分离方法和培养条件探索鲫鱼肝细胞的原代培养 以建立稳定的鲫鱼肝细胞原代培养模型 ; WST-1 ， 。 : 用台盼蓝染色检测细胞存活率 用 检测细胞活力 同时观察长期培养过程中肝细胞的形态变化 结果显示 组 4 ～ 5 d ， ; 织块培养 后肝细胞从组织块中迁出并增殖 但这种方法所需时间长且细胞不易收集 机械分散法收集的细胞 ， ; 。 0 ． 1% 30 min ， 少 细胞存活率低 而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的分离和培养效果 用 胰蛋白酶消化 每克肝重可 1． 47 × 108 ， 91． 43% 。 。 10% 收集 个细胞 平均存活率为 培养基和血清浓度均会影响肝细胞的贴壁和生长 在含有 (V/ V) (FCS)M199 ，4 % CO 、28℃ ， 8 ～ 9 d 。 胎牛血清 培养基中 2 肝细胞培养 后传代 : ; ; ; 关键词 鲫鱼 肝细胞 胰蛋白酶 原代培养 :S917 :A :1000 － 7091 (2011) － 0206 － 07 中图分类号 文献标识码 文章编号 增刊 Optimization of Isolation and Primary Culture of Hepatocytes in Crucian Carp (Carassius auratus )