生物化学实验技能大赛实验设计方案.doc

PAGE PAGE 7 邻二氮菲法测定蔬菜中铁的含量 摘 要 用邻二氮菲分光光度法直接测定蔬菜中的铁含量，方法简便、快速、准确，为指导人们合理食用蔬菜进行补铁及进一步开发蔬菜产品提供了可靠的理论依据[1 2]。 关键词 蔬菜 铁含量 邻二氮菲 1. 前言 铁作为必需的微量金属元素，对于人体的健康十分重要。铁是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其它酶系统的主要组分，可协助氧的运输，还能促进脂肪的氧化。蔬菜是人们摄取微量铁的主要途径之一，缺铁可造成贫血并容易疲劳，而过多则会导致急性中毒。所以，蔬菜中铁含量的测定具有重要的营养学意义，可为指导人们合理食用蔬菜进行补铁以防治缺铁性贫血，提供可靠的理论依据。 2. 实验目的 综合运用所学知识，用仪器分析法测定金属元素含量；练习灵活运用各种基本操作和查阅资料的能力。 3. 实验原理 蔬菜中金属元素常与有机物结合成难溶或难于解离的物质，常采用有机物破坏法是被测的金属元素以氧化物或无机盐的形式残留下来，以便测定。本实验采用有机物破坏法（干法），即在高温下加入氧化剂，使有机物质分解。根据不同浓度的物质具有不同的吸光度，采用分光光度法来测定蔬菜中的铁含量。在pH值4～6的条件下，以盐酸羟胺将三价铁还原为二价铁，二价铁再与邻二氮菲（phen）生成桔红色络合物［3］，用分光光度计在510nm测定蔬菜中铁的含量。 盐酸羟胺还原三价铁的反应如下： 2 Fe3++2NH2OH·HCl→2 Fe2++N2+2H2O+4H++2Cl- 邻二氮菲与二价铁的反应式如下： Fe2+ + 3(phen) =Fe(phen)3 4. 实验器材 722型分光光度计（1台），电子天平（1台）蒸发皿（4个），100mL容量瓶(4个)，50mL容量瓶（16个），500mL试剂瓶（7个），大烧杯（4个），量筒（1个），胶头滴管（4个），玻璃棒（4个），1.5mL移液管（2个），5mL移液管（8个），10mL移液管（1个），25mL移液管（1个），漏斗（4个），酒精灯（4个），洗瓶（1个），马弗炉（1个），电磁炉（1台），石棉网，三角架，铁架台/电炉，剪刀（1把），火柴（1盒），标签若干等。 5. 实验材料及试剂 5. 1实验材料及其处理 新鲜菠菜（Spinacia oleracea）、花椰菜（Brassica oleracea L. var. botrytis L.）、芹菜（Apium graveolens）、黄瓜（Cucumis sativus Linn.）各0.5Kg 将菠菜、花椰菜、芹菜、黄瓜洗净、晾干，准确称取100.0g，用剪刀剪碎，放在蒸发皿中，放于电磁炉上加热至没有浓烟为止。然后放到马弗炉高温烘烤若干小时，最后取出冷却至室温。将上述试样各加入5mL1:1稀释的HCI，至全部溶解。若不溶解可加入数滴硝酸，若还不溶解在酒精灯上加热，冷却后过滤。将滤液转移到50mL的容量瓶中，定容至刻线，待用。 5. 2 实验试剂及其配制 200ug/mL的铁标准溶液：准确称取0.70g 分析纯FeSO4 ·(NH4)2 SO4·6H2O，置于烧杯中用15mL 2mol/L盐酸溶解后移入500 20ug/mL的铁溶液：用移液管准确移取5mL 200ug/mL 的铁标准溶液于50mL容量瓶中，定容，摇匀。 2mol/L的HCI：用移液管准确移取浓盐酸10mL于50mL容量瓶中，定容，摇匀。 1:1的HCI：用移液管准确移取浓盐酸25mL于50mL容量瓶中，定容，摇匀。 10%的盐酸羟胺：称取盐酸羟胺固体50g，用量筒量取400mL水加热溶解，转移至500mL容量瓶中，定容，摇匀。 0.2%的邻二氮菲：准确称取邻二氮菲1.0g，置于烧杯中加热溶解后，移入500mL容量瓶中，定容，摇匀。（临用时配制 1mol/L醋酸钠-醋酸缓冲溶液：称取醋酸钠（CH3COONa·3H2O）固体68g，置于烧杯中,加30ml冰醋酸溶解，加水溶解后，移入500mL容量瓶中，定容，摇匀。 浓硝酸（比重1.429g/mL）。 6. 实验操作步骤 6.1 标准曲线的绘制 在6个50mL容量瓶中，按下表由上到下一次加入各试剂。对各容量瓶均用水稀释至刻度，摇匀。 容量瓶编号 1 2 3 4 5 6 20ug/mL铁标溶液/mL 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 10%的盐酸羟胺溶液/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 2min后,1mol/L的醋酸钠溶液/mL 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 0.2%的邻二氮菲溶液/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 用分光光度计，在波长510nm处用1cm的比色皿，以蒸馏水为参比，测定上述各溶液的吸光度,将数据填入表1，以含铁量为横坐标，吸光度A为纵坐标，