[其它模板]201134定稿选修3-12基因工程的基本操作程序.ppt

四 目的基因的检测与鉴定——检查是否成功 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组 DNA分子吗？ 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持 和表达？ 不一定，需要检测 1.检测方法： 分子杂交技术： （1）DNA分子与DNA分子的之间杂交 （2）DNA分子与RNA分子的之间杂交 （3）蛋白质分子（抗原与抗体）之间杂交 2.个体生物学水平的鉴定： 抗虫、抗病结种实验，活性比较实验 1.检测 转基因生 物的DNA 探针 15N 15N 14N 14N （1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了 目的基因 基因探针： 放射性同位素等标记的DNA分子 方法： DNA分子杂交技术 变性 变性 如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因。 变性 方法： DNA分子杂交技术 （2）检测目的基因是否转录出了mRNA 探针 15N 15N 转基因生物 的mRNA 14N 14N 如果显示出杂交带，就表明待测样品目的基因已经转录。 提取 （3）检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法：抗原-抗体杂交 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 证明：提取蛋白质与Bt毒素蛋白质一样 例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 2.鉴定——个体生物学水平的鉴定 （1）多细胞个体 抗虫、抗病结种实验，活性比较实验 不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。 受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？ 若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。 细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 （2）单细胞生物 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 1、有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶 课堂练习 2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ 课堂练习 3、有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达 1 A 2D 3 D 4 C * 1.2基因工程的基本操作程序 二、基因表达载体的构建 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 一、目的基因的获取 1. 基因的结构 2.目的基因的概念 3.目的基因的获取的方法 1.基因的结构 （1）原核生物基因结构 编码区 非编码区 非编码区 编码区上游 编码区下游 编码蛋白质 调控遗传信息的表达 （调控程序） …A‥………ATGTGCACGTAGTTA………‥G……T‥………TACACGTGCATCAAT………‥C… 启动子 终止子 编码区 非编码区 非编码区 启动子 终止子 ATGTGCACGTAGTTA TACACGTGCATCAAT RNA聚合酶 AUGUGCACGUAGUUA 启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。 RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质. 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。 编码区 非编码区 非编码区 （能编码蛋白质） 启动子 终止子 （2）真核与原核生物基因结构的比较 外显子 内含子 编码蛋白质 （