[医学]基因工程抗体.ppt

免疫毒素 C C V C V C C C SPDP SPDP Ricin A Ricin A （α-FcγRI-Ricin A） Ricin A:蓖麻毒素A,对肿瘤细胞具有毒性作用 CH1 CH2 CH3 IL-2 scFv IL-2 免疫细胞因子(Immunocytokine) 五、细胞内抗体 细胞内抗体主要是指在细胞内合成并作用于细胞内组分的抗体，亦称内抗体（intrabody）。 目前的研究主要集中在单链抗体上，在ScFv的C端或N端插入其它靶向信号（targeting signals），如分泌信号、核定位信号、线粒体定位信号和内质网滞留信号等，从而进行检测、识别、发挥特定功能。 细胞内抗体的应用： 由于细胞内抗体具有高亲和力及选择结合特性，因而可通过多种机制调控细胞的生理过程及代谢。作用机理表现为： 阻断靶蛋白的活性部位 阻断细胞内蛋白－蛋白相互作用 干扰细胞内靶蛋白的转运 促使靶蛋白降解 六、抗原化抗体（antigenized antibody, AbAg） AbAg是应用基因工程技术，把编码蛋白质抗原表位的核苷酸片段插入重链CDR3序列中进行表达，从而产生具有天然抗原表位构象和免疫原性的新型抗体。 今后抗体药物发展的方向 寻找新的靶抗原 基于抗原立体结构设计抗体 基于抗原-抗体相互作用设计小分子抗 体模拟物 最理想的单克隆抗体 100%人源 人类免疫系统自然产生 25年来的全人抗体的尝试 鼠骨髓瘤不适合与人B细胞融合 稳定性差 抗体产量低 非洲淋巴细胞瘤病毒 (EBV) 保存抗体分泌细胞 细胞株不稳定 抗体的产量低 不能特异性地保存抗体分泌细胞 很难获得人类骨髓瘤细胞株 成功建立人骨髓瘤细胞系，人源抗体进入新的里程 用 途：能稳定的保持人B细胞分泌抗体的能力 发明人：英国剑桥大学的Dr Karpas教授 意 义：1 在整体水平上研究人类产生抗体 2 开创人类抗体基因组学的研究 评 价：1 诺贝尔奖得主Dr Milstein 推荐发表在PNAS 2 世界权威杂志“科学”发表了新闻评述 3 剑桥大学开了新闻发布会 未来单抗开发的完美方案 从已知治疗靶子生产高亲和力全人抗体 全人抗体挑战靶分子的筛选 开发未知抗原的治疗用抗体 * 基因工程抗体 根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体等。 Genetic engineering antibody 单克隆抗体用于治疗存在的问题 1、单克隆抗体的特异性 由于肿瘤特异性抗原较少，缺乏对肿瘤有严 格特异性的单抗，对正常组织有交叉反应； 2、异种抗体反应 鼠源性单抗用于人体，导致异源性超敏反应 理想的抗体药物的性质 高特异性和高亲和力（Kd=108~1010L/M） 对人没有免疫原性，不诱导机体对抗体的排斥反应 游离抗体不激活补体 一旦结合到靶抗原上，能诱导效应功能 细胞系稳定，适合在无血清培养基中进行 大规模培养 抗体符合生物制品标准 问 题 异源蛋白导致产生抗抗体，影响靶向性和效果 靶部位摄取的量太低 效应功能弱 在体内被清除速度快 对 策 抗体人源化 改变抗体分子大小 连接毒素、放射性同位素、药物 抗体人源化 抗体治疗存在的问题及对策 抗体药物改造的方向 抗体人源化和人源抗体制备 改变抗体分子大小 增强抗体亲和力 增强抗体效应功能 单克隆抗体人源化的改进 鼠抗体人源化（人-鼠嵌合、改型抗体） 小分子抗体（Fab、单链、单域、超变区多肽） 基因工程抗体（双特异、免疫黏连素、催化抗体） 人源抗体（噬菌体抗体库、转基因小鼠） 人-人抗体 1、抗体人源化 鼠单克隆抗体人源化 ：嵌合抗体、改型抗体 小分子抗体：单价(Fab、ScFv、单域抗体、 超变区多肽)、多价（Di-, Tri-, Minibody） 特殊类型抗体 (双特异性抗体、细胞内抗体、 抗原化抗体、免疫脂质体) 抗体融合蛋白 （免疫粘连素、免疫毒素、催 化抗体） VH和VL是抗原决定簇结合位点 高变区 HVR 决定簇互补区CDR 骨架区FR CH1和CL：Ig同种异型的遗传标志 CH2：补体结合位点 CH3：某些细胞Fc受体结合部位 第一代的抗体人源化—嵌合抗体 从杂交瘤细胞分离出鼠MAb功能性可变