[医学]杨燕军实验3离体蛙心灌流.ppt

生理学实验课程 杨燕军 752253－666 （O）（M） yang712100@ 描记正常蛙心收缩曲线 　　 　　　　曲线疏密：代表心跳频率。 　　　　曲线的规律性：代表心室的节律性。 　　　　曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。 　　　　曲线的基线：代表心室舒张的程度。 期前收缩和代偿间歇 吸出插管内全部任氏液，置换等量0.65%NaCl ，观察心缩曲 线变化，待效应明显后，吸出灌流液，用新鲜任氏液换洗3次， 直至心缩曲线恢复正常。 加入1~2滴1%CaCl2于新换入的任氏液中，观察心缩曲 线的变化。待出现效应后，用新鲜任氏液换洗3次至曲线 恢复正常。 加1滴3% 乳酸 加入1~2滴0.01%Adr于任氏液中，待效应出现后，用 任氏液换洗至曲线恢复正常。 加入1-2滴0.01%Ach于任氏液中，待效应出现后，用任 氏液换洗至曲线恢复正常。 加入5~6滴2%CaCl2于新换入的任氏液中，观察心缩曲 线的变化。待出现效应后，用新鲜任氏液换洗3次至曲线 恢复正常。 注意事项 制备标本时，应按指导试探着插管，避免损伤心脏(包括静脉窦)。 每次换液时，插管内的液面均应保持恒定高度。 本实验所用药品种类较多，吸任氏液的吸管、吸心插管内溶液的吸管和各种药物的吸管要分开，不可混淆，互相污染，以免影响结果。 药物作用不明显时，可加量。 随时滴加任氏液于心脏表面使之湿润。 固定换能器时应稍向下倾斜，以免自心脏滴下的水流入换能器内造成短路。 部分结果分析 0.65%NaCl，心跳减弱 心肌收缩活动有Ca2+触发，心肌肌浆网不发达，因此其收缩强弱依赖于细胞外Ca2+浓度 部分结果分析 高K+任氏液，心跳明显减弱甚至停跳于舒张状态 部分结果分析 高Ca2+，心缩加强，舒张不完全，甚至停于收缩状态 部分结果分析 肾上腺素，心脏正性作用并且舒张完全 部分结果分析 乙酰胆碱，心缩减弱，心率减慢，兴奋传导速度变慢 置换等量0.65%NaCl 灌流液中无Ca2+ 进入细胞内Ca2+ 胞浆内Ca2+ 心肌收缩力 心肌的兴奋-收缩耦联 细胞外Ca2+ Ca2+内流 Ca2+与肌钙蛋白的结合 心肌收缩力 但舒张不完全,收缩基线上移 细胞外H+ ↑ H+内流 H+和Ca2+离子竞争性结合肌钙蛋白的结合位点 抑制Ca2+离子与肌钙蛋白结合 心肌收缩力 ↓ 心率 Adr与心肌受体（β1）结合 心率 心肌收缩力 慢通道Ca2+通透性 4期自动去极速度 慢反应细胞，0期Ca2+内流 AP上升速度和幅度 房室交界兴奋传导 复极相K+外流 复极过程加速 平台期进入细胞内Ca2+ 房室交界慢反应细胞AP幅度 最大复极电位负值增加，离阈电位距离 Ach与M受体结合 抑制钙通道， Ca2+内流 膜对K+的通透性 AP2、3期缩短，Ca2+内流 心肌收缩力 心率 舒张期自动去极速度 兴奋传导速度减慢 细胞外Ca2+ Ca2+内流 Ca2+与肌钙蛋白的结合 心肌收缩力 但舒张不完全,收缩基线上移 当细胞内Ca2+ 时 Ca2+与肌钙蛋白得不到解离 心肌持续收缩,停止于收缩状态 钙僵 灌流液中缺乏Ca2+，心肌细胞内Ca2+大大减少，心肌兴奋--收缩藕联过程减弱，心肌收缩活动减弱 K+与Ca2+有竞争性拮抗作用。细胞外K+浓度增加可抑制细胞膜对Ca2+的转运，从而使进入胞内的Ca2+减少，心肌兴奋--收缩藕联过程减弱，心缩力降低甚至停于舒张状态。 心肌舒缩活动取决于胞内Ca2+浓度，当Ca2+升高到0.01mM，肌钙蛋白可结合足够Ca2+发生构型改变而触发心肌收缩；当胞内Ca2+浓度降到0.0001mM时则可解离发生心肌舒张。高Ca2+使肌钙蛋白与Ca2+不能解离而造成心肌持续收缩。 * * * * * * 实 验 三 电刺激及化学因素对心脏活动的影响 实 验 三 电刺激及化学因素对心脏活动的影响 实验目的: 实验原理: 实验对象: 蟾蜍 器材和药品: 实验步骤: 1 .制备离体蛙心: 2 .仪器连接: 记录正常曲线 期前收缩和代偿间歇(单刺激,1V) 0.65%NaCl置换任氏液 1%CaCl2 1~2滴 3%乳酸 1~2滴 0.01%Adr 1~2滴 0.01%Ach 1~2滴 8 2%CaCl2 5~6滴 注意事项: 观察项目: 下次实验:膈神经放电 实验目的 3. 观察Na+、K+、Ca2+、 Adr、Ach对心脏活动的影响，理解内环境理化因素相对恒定对维持心脏正常活动的重要性。 1. 学习离体蛙心灌流方法。 2. 观察在心脏活动的不同时期给予刺激所引起的期前收缩和代偿间歇。 实验原理 心肌具有4个