[工程科技]06第2章 糖和苷.ppt

一、研究糖链结构的一般程序 ●分子量测定 ▲单糖、低聚糖及其苷的分子量测定：目前主要用MS法，但由于它们为多羟基化合物，普通EI-MS往往测得的最高质量峰为M-H2O，而并非分子离子峰；所以，多采用FD-MS、FAB-MS等。 ▲多糖的分子量测定：目前仍沿用经典高分子化合物分子量的测定方法，如粘度法、沉降法等，甚至仅仅测定标示其平均分子量。 六、糖链的结构测定 ●单糖的鉴定 为了鉴定低聚糖、苷类乃至多糖分子中的单糖种类及其比例，通常是将其苷键全部水解（乙酰解），然后经TLC、PC、GC或HPLC检出。 一、研究糖链结构的一般程序 六、糖链的结构测定 ●单糖间、糖与苷元间连接位置的确定 确定苷键的连接位置，目前主要是应用13C-NMR中的苷化位移法，其方法是： 将苷化合物或低聚糖先行甲醚化或乙酰化，测得其13C-NMR谱，然后将其水解，再测其水解产物的13C-NMR谱，归属比较其变化，以推断苷键的连接位置。 如： 一、研究糖链结构的一般程序 六、糖链的结构测定 水解前后 △δ： C2 29.7 32.0 -2.3 C3 77.0 70.9 +6.1 C4 34.3 38.4 -4.1 因成苷引起的化学位移变化，专业上称之为苷化位移（glycosidation shift）。 ●糖链连接顺序的确定 ▲经典方法：缓和水解；酶解；乙酰解等 这些方法都是将苷部分裂解成次级苷或低聚糖，再分析鉴定糖的碎片。 虽然经典方法至今尚有一定的实际应用价值，但日新月异的波谱技术已正在取代其角色。 一、研究糖链结构的一般程序 六、糖链的结构测定 ▲ MS法测定糖链连接顺序 ◆技术→FDMS、FABMS等。 ◆优点→不必制备衍生物,用量小,准确,简便。 ▲NMR法测定糖链连接顺序 是将糖及其苷类衍生物全乙酰化后，测定观察两糖之间质子的远程偶合或NOE效应，以期确定糖的连接顺序。 ●苷键构型的确定： ▲经典方法：苷键构型的确定虽然经典的酶水解法、分子旋光法*（即Klyne法）仍时有应用，但目前多被NMR法所代替。 一、研究糖链结构的一般程序 第六节 糖链的结构测定 ▲ NMR法确定苷键构型：主要是利用成苷糖的端基质子在δ5.0左右，少被覆盖，依据其与C2上质子偶合裂分的不同进行判断的。如glucose： 可见β-甙键的Anomeric-H J多在6.0-8.0Hz，而α-则多在2.0-4.0Hz，非常易于区别，但对于诸如甘露糖和鼠李糖之类则因C2-H处在横键上，双面角相近，其J值差别不大，不足以区分α-和β-异构体，遇到此种情况，多采用13C-NMR的门控去偶技术测其端基碳与端基质子的偶合常数，即JC1-H1来区别。如： 吡喃糖苷C1-H是e键时(α-苷)1JC1-H1=170Hz C1-H是a键时(β-苷)1JC1-H1=160Hz ▲ NMR法确定苷键构型 七、糖的提取分离㈠提取 ㈠提取 1)主要为溶剂法—水、稀醇（单糖、低聚糖、多糖） 糖类的提取可根据它们对乙醇和水的溶解度不同，而采用冷热水、冷热稀醇等条件。 2)苷类分子的极性随着糖基的增多而增大。可根据其极性大小，来选择相适应的溶剂。 3)破坏或抑制植物体内酶的方法： 采集新鲜材料——迅速加热干燥——冷冻保存等 七、糖的提取分离㈡分离 ㈡分离 1．活性炭柱色谱 2．纤维素色谱 3．离子交换柱色谱 4．凝胶柱色谱 5．季铵氢氧化物沉淀法 6．分级沉淀或分级溶解法 7．蛋白质除去法 七、糖的提取分离㈡分离 1．活性炭柱色谱 ⑴概述 用途——分离水溶性物质较好 如：氨基酸、糖类及某些苷类。 特点：（对于活性炭柱色谱） ①上样量大，分离效果较好，适合大量制备； ②来源容易，价格廉； ③缺点：无测定其吸附力级别的理想方法。 七、糖的提取分离㈡分离 分类： ①粉末状活性炭——颗粒细，总表面积大，吸附力及吸附量大。 ②颗粒状活性炭——颗粒较上者大，吸附力及吸附量也较上者次之。 ③绵纶-活性炭——以锦纶为粘合剂，将粉末状活性炭制成颗粒，吸附力最弱。 七、糖的提取分离㈡分离 ⑵活性炭对物质的吸附规律 对分子量大的化合物吸附力大于分子量小的化合物，即：多糖 单糖 活性炭在水溶液中的吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱。洗脱顺序： H2O、10%、20%