动物急性毒性实验报告.docVIP

生物工程综合实验 动物急性毒性实验 实验报告集 班级 生工1411 学号 姓名 苏州科技大学 化学生物与材料工程学院 2017年 实验室学生守则 一、严格遵守实验室各项规章制度和管理措施，服从教师及实验技术人员 的指导。 二、严格按照实验要求，做好实验预习,实验之前5分钟进入实验室，及时、 准确地完成实验任务，实事求是地完成实验报告，杜绝弄虚作假。 三、严格执行操作规定，爱护仪器设备及工具。凡不按教师的指导擅自操 作引起仪器、设备损坏者，应予赔偿。 四、爱护实验室公共财物，节约水电、材料和试剂。未经允许不得随便挪 动非实验需用的其他仪器，不得随便拆装仪器或将仪器、工具带至室 外。 五、持实验室的严肃安静，不得大声喧哗、嘻闹，严禁在实验室内抽烟和 吃东西。 六、严防事故，确保实验室安全，发现异常情况，应及时向有关教师和管 理人员报告。 七、每次实验结束后，主动整理好仪器设备，归还所借器材，关闭电源、 水源，按指导老师的要求做好实验结束工作及室内外的清洁卫生工作， 经指导老师许可后，方可离开。 预 习 报 告 名称 动物急性毒性实验 日期 2017.11.27-2017-12.1 实验目的和要求：使学生了解毒理学研究中动物实验的常规操作方法和技术；了解和掌握为了测定一种未知的环境化学物对有机体是否是安全的，必须进行哪些试验，获得哪些必要的数据；这些试验的基本步骤是什么，试验数据应该如何处理。了解和掌握实验动物的选择、抓取、常规染毒和生物材料的采集方法等内容、学习和掌握急性毒性试验和生物指标试验的目的，原理，以及测定相关的参数，如半数致死剂量，生长抑制效应等所需要的方法和步骤。 实验材料：活环毛蚓 主要仪器：人工气候箱，分光光度计，冷冻离心机，试管13支，移液器，振荡水浴锅，烧杯，研钵等 主要步骤： 1. 清肠：挑选一定数量具有生殖环带的健康蚯蚓，用蒸馏水清洗，放于烧杯中，用保鲜膜封口，解剖针扎孔。将烧杯置于温度为20±2 ℃，湿度约75%的人工气候箱中清肠24h。 2. 溶液配制：在直径18cm的培养皿(或以1000mL烧杯代替)底铺衬滤纸，以刚好遮住皿底为宜。按预备实验确定的剂量，配制系列浓度，取适量倒入培养皿中，以刚好浸没滤纸为宜 3. 滤纸实验 (1). 将清肠后的蚯蚓用去离子水冲洗干净，滤纸吸干体表水分 (2). 每组10条蚯蚓分别称重，测量体长，供试 (3). 每一培养皿放入10条蚯蚓 (4). 保鲜膜封口，解剖针扎孔。 4. 培养与观察 将培养皿置于人工气候箱中培养，设置标准实验条件：温度为20±2℃，湿度为75±7%; 光照为1333 lx（间歇光照，即12h光照， 12h黑暗）。计算Cd2+ 暴露后蚯蚓18h的LC50、24h的LC50。 5. 低浓度Cd2+急性毒性试验 (l). 在确定蚯蚓的24h LC50 后，进行蚯蚓急性毒性实验。设置空白对照组，空白对照组用去离子水代替受试物；染毒实验前重复上述（1）步骤的清肠。 (2). 在蚯蚓的致死范围内设置4个浓度梯度（0、1/5LC50、1/3 LC50、1/2 LC50）进行蚯蚓急性毒性试验。每组8条。 (3). 实验24h 后取各浓度处理组蚯蚓3 条做平行试验，洗净剪取其环带前部分，用磷酸缓冲液洗掉表面血液，用滤纸吸干水分，放入研钵加2 mL 磷酸缓冲液进行研磨，再进行离心（9，000 r·min-1）10 min，上清液即为粗酶液。 (4).采用改进邻苯三酚自氧化法测定SOD活性。 ①邻苯三酚自氧化速率的测定：取4.5mL0.1mol·L -1Tris-HCl（pH =8.2）缓冲液，4.2 mL蒸馏水，混匀后在25℃水浴保温20 min，取出后立即加入25℃预热过的3 mmolL-1 邻苯三酚0.3 mL（以10 mmol·L -1 HCl 配制，空白管用10 mmol·L -1HCl代替邻苯三酚的HCl 溶液），在25℃恒温水浴锅中水浴，迅速摇匀倒入比色皿（光径1 cm），每隔30 s在325 nm处测定吸光度A值1次，共测3min。计算线性范围内每分钟A 的增值，此即为邻苯三酚的自氧化速率。 ②样品中SOD 酶活力测定：加入邻苯三酚前，先加入一定体积的SOD 粗酶液（约0.2 mL，需稀释），蒸馏水减少相应体积（即粗酶液和蒸馏水总体积为4.2 mL），其它均与上述①中所述一致，计算加粗酶液后邻苯三酚自氧化速率。需稀释至3min内数值均有变化；数值大于1。 ③每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50%的酶量定义为一个酶单位。酶活性单位的计算公式如下：