第7章放射自显影术.ppt

第一节 放射自显影术的概况 一、概 念 放射自显影术（autoradiography，ARG） 放射性核素所产生的射线直接作用于感光材料，使其产生潜影，经显影、定影处理而得到与标本中放射性核素所在部位、活度一致的由银颗粒组成的影像。这种利用感光材料中感光银粒所在的位置和黑度记录、检查和测量放射性示踪剂在标本内相应位置和数量的方法，称为放射自显影术。 放射自显影像（ autoradiogram） 简称自显影（ARG） 二、潜影形成和消褪 （一）潜影形成 敏化中心/显影中心 潜影形成与放射源的活度、曝光时间及乳胶的灵敏度有关。 放射源活度大、曝光时间长、卤化银晶体上缺陷多等，都有利于潜影形成 在潜影形成过程中，乳胶中每颗卤化银晶体都是一个单独变化的单元。在宏观自显影中肉眼所看到的影像是这些单元变化后的总和。 （二）潜影消褪 已形成的潜影（银原子），如不及时进行显影、定影处理，则在水与氧的作用下可以发生消褪（变回银离子），故曝光期间应注意干燥、低温、甚至隔氧 三、一般步骤 1.引入示踪剂： 向机体内（或离体标本内）引入放射性示踪剂 2.标本制备： 标本制成切片、涂片、电镜标本等 3.自显影制备： 暗室中标本与感光材料接触 4.曝光： 避光条件下使核射线作用于感光材料 5.照相处理： 显影、定影、水洗 6.标本染色、封固 四、分类 1. 宏观自显影（Macroscopic ARG） 肉眼或放大镜观察，用黑度判定示踪剂的部位和定量；观察范围较大，分辨率较低； 整体小动物、大动物的脏器或肢体的切片； 各种色层谱、电泳谱、免疫沉淀板等； 2. 光学显微镜（光镜）自显影 （Light Microscopic ARG） 组织石蜡切片、冰冻切片 细胞涂片 光镜下观察，以银粒密度来判断组织、细胞内示踪剂的部位和定量，观察范围小，要求分辨率高。标本与自显影像配合观察。 3. 电子显微镜（电镜）自显影 （Electro-Microscopic ARG） 标本制作同一般电镜； 单层银粒的乳胶层； 用电镜观察细胞超微结构内单层银粒的分布，以判断示踪剂的部位和定量，观察范围更小，分辨率要求更高，阅读时标本和影像配合观察； 五、常用核素 发射下列粒子流的核素： α、β、β＋射线、俄歇电子、内转换电子 能量低的优先，因分辨率高 如3H、14C、125I 短T1/2的核素尽量避免用 若用，则选用较快的标本制备和自显影方法，所用剂量也应加大 同位素标记 选用化合物中原有元素的同位素来标记 六、感光材料 银盐 ＋ 明胶 感光物质 基质 （一） 原子核乳胶（Nuclear Emulsion） 溴化银＋明胶 临用前，暗室中热水浴融化（如40℃）； 液体核乳胶 直接涂在标本及其支持物上；光镜ARG、电镜ARG 乳胶涂层的厚度由所加乳胶量调节，用去离子水或双蒸水稀释 加入6-硝基苯骈咪唑、甘油和乙醇的混合液（简称6-甘-醇），使乳胶易于流布，减少气泡并降低本底 加入硫酸铬钾（铬矾）可提高乳胶层的强度，减少体积膨胀 加入“1292”（一种表面活性剂）可改善乳胶的成膜性 核乳胶干板 涂在玻片上，直接使用；光镜ARG 、宏观ARG 揭膜核乳胶 涂在胶质或纤维质衬底上，而衬底贴合在玻片或薄膜托片上，用时揭下来；定量光镜ARG 液体核乳胶配方举例 取所需乳胶量在40℃水浴中融化后，按下列比例顺序缓缓加入，并用玻棒轻轻搅匀。 液体核乳胶 100.0 ml 6-甘-醇 9.5 ml 铬矾(2%水溶液） 4.2 ml 6-甘-醇配方： 6-硝基苯骈咪唑（1/600,用1:1乙醇水溶液配） 3.8ml 硫酸铬钾（2％水溶液） 5.0ml 甘油（1:2水溶液） 5.3ml （二）氚片（tritium film） 溴化银＋碘化银＋明胶组成的乳胶，涂敷于醋酸纤维素酯片基的一面上； Ag晶体平均直径1μm, 胶厚5～10μm；对核射线较敏感，多用于3H标记物示踪的宏观自显影 （三）X光片（X-ray film） 溴化银＋碘化银＋明胶组成的乳胶，涂敷于醋酸纤维素酯片基的两面上；再涂上明胶保护层；Ag晶体平均直径2.5～3μm, 胶厚15～30 μm；对核射线较敏感，多用于射线能量较高的核素标记物的宏观自显影 （四）自显影增强剂和增强屏 ，磷屏成像 七、照相处理 （一）显影(development)、定影(fixation)、水洗 乳胶经核射线作用后，感受射线作用的卤化银晶体形成肉眼不能察出的潜影，其余晶体则不形成潜影 形成潜影的卤化银晶体在显影过程中被还原成金属银颗粒 未形成潜影的晶体通过定影而溶去 经过显影、定影后形成可