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人血清（浆）胰岛素ELISA定量试剂盒说明书 （测定范围：0.5－50μIU/ml） 概述： 胰岛素是由胰岛β细胞合成和分泌的蛋白质激素，由A和B两条链组成。A链和B链分别含有21和30个氨基酸残基，分子量为5734。胰岛素的生理作用主要是促进糖代谢，促进葡萄糖的利用和糖原合成，抑制糖原异生，从而维持血糖恒定。测定血清（浆）胰岛素水平并结合血糖变化是判断β细胞的功能是否正常以及估计胰岛素敏感性的常用手段。然而由于胰岛素和胰岛素原的抗原性有很大程度的交叉，而目前常用的免疫分析法特异性很差，不能区分血中共存的胰岛素和胰岛素原，所测定的是免疫反应性胰岛素，即胰岛素与胰岛素原及其它胰岛素类似物的总体水平，而不是胰岛素真正的含量。我们推出的研究用胰岛素ELISA试剂盒，选取针对胰岛素不同抗原决定簇的两种单克隆抗体（单抗）分别固化于微孔中和生物素标记，采用双抗体夹心模式和生物素-亲和素放大系统，具有特异性强、灵敏度高和操作简便等优点，可准确测定人血清（浆）中胰岛素的含量，适用于：（1）评价β细胞的功能和估计胰岛素抵抗性，研究肥胖、糖尿病、高血压和冠心病的病理生理；（2）1型和2型糖尿病的鉴别诊断；（3）诊断胰岛素瘤；以及（4）2型糖尿病患者口服降糖药的选择等。 试剂盒组成 96孔预包被微孔板 1个 20×酶免试验缓冲液 1瓶（50ml）μIU） 标准品及生物素化胰岛素单抗稀释液（15ml） 生物素标记胰岛素抗体 1管 (100μl) 亲和素-辣根过氧化物酶稀释液（15ml） 亲和素-辣根过氧化物酶溶液（SA-HRP）（10μl） 底物溶液（TMB）（12ml） 终止液（2N HCL）(15ml) 封板模 1个 自备材料： 酶标仪（带450nm） 加样器，带10ul、100ul、1000ul的一次性尖头 吸水纸/巾 去离子水 试验试剂的准备 1×试验缓冲液： 950ml去离子水中加入浓缩的50ml酶免试验缓冲液即可。本缓冲液用于洗板。浓缩缓冲液使用之前置于37℃水浴中使其结晶完全融化。配制好的洗液置于4-8℃保存。 生物素标记的人胰岛素抗体：用100μl生物素化胰岛素单抗稀释液重新溶解冻干粉（注意溶解壁上的粉末，以免丢失粘在管壁或盖上的抗体冻干粉） 。使用前将本抗体用生物素化胰岛素单抗稀释液按1︰80稀释。 亲和素-辣根过氧化物酶（SA-HRP）l已稀释好的亲和素-辣根过氧化物酶结合物，置室温轻摇30分钟，重复第5步骤，洗板6次。 每孔加100μl底物（TMB）溶液，室温闭光反应10-15分钟。 每孔加入100μl终止液终止反应。 用酶标仪在波长450nm读取OD值。 结果计算 手工作图采用半对数坐标纸，以标准品浓度为横坐标、相应的OD值为纵坐标作标准曲线，标本的OD值在标准曲线上的对应浓度即为该标本的胰岛素含量，计算机操作采用4参数或Cubic Spline方式拟合曲线。 注意事项 请在2℃-8℃下保存并在有效期内使用，不同批号试剂，请勿混用。 使用前，请将所有组分置室温平衡；用时请将瓶内物混匀。试剂盒启用后尽量一次用完。未用完的试剂拧紧瓶盖，板条置封袋内， 4℃保存。生物素标记抗体和胰岛素标准品重溶后请保存于-20℃，避免反复冻融；HRP、反应缓冲液、终止液4℃保存。 本试剂盒的测定范围是0.5－50μIU/ml。建议采用新鲜血清或血浆标本，并根据具体情况对样品进行适度稀释。标准品需双复孔测定；标本若不能及时测定，请于-20℃或-70℃存放，避免反复冻融。 * 空腹状态下采集的血样、不需稀释，接受糖餐刺激后，除1型糖尿病以外的其他类型血样可稀释3-5倍进行检测。单位：μIU/ml。 建议用校准的加样器加所有成份。 以洗板机洗板时,每孔注液量不应少于300ul, 洗板次数不应少于5次, 浸泡时间不少于5秒, 并注意检查加样头是否堵塞。手工洗板时, 用带纸屑的吸水材料应慎重, 防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物与显色剂发生反应。 用终止液终止反应后，请于20分钟内读取OD值。 1 2