检测试剂盒翻译文.doc

PMSG ELISA 检测试剂盒 使用简要说明 DRG PMSG ELISA 是一种酶联免疫检测试剂盒，用于孕马血清和血浆的质量检测。 PMSG 或eCG 是由妊娠母马子宫内膜杯状细胞分泌的一种激素。该激素在怀孕40天至120天的妊娠母马的血液中一般都能检测出来，接近60天时该激素可达到峰值。因为该激素只在妊娠一定时期的母马中存在，而形成了一种特殊的检测方法。妊娠母马在怀孕150天后，其血液中再不能检测出该激素。 相对于早期超声波扫描检测技术而言，它作为马的妊娠检测方法，是比较合适的，也是较为方便的。它能使检测者在实验室中，既能快速、也很经济地获得妊娠母马中 PMSG 含量的相关数据。 原理 DRG PMSG EIA 是根据夹心技术，形成的固相酶联免疫检测试剂。微孔中包被的单克隆抗体直接朝向特定的PMSG 分子中的抗原位点。首先将含有PMSG 的血清样品在包被有PMSG抗体的微孔中孵育，然后再将酶底物注入微孔中孵育，没有结合的酶底物则用蒸馏水冲洗掉。结合的酶底物与样品中的PMSG 浓度成正比，加入显示剂后，其颜色强度与样品中的PMSG 浓度也成正比。 用于检测的材料 包被条：包被条微孔中包被了抗PMSG 的单克隆抗体。 酶联物11毫升（瓶装）：其结合有辣根过氧化物抗PMSG 抗体。 底物液：TMB 11毫升（瓶装）。 终止液：6毫升（瓶装），0.5M 硫酸。 参考标准品：每小瓶1毫升，共5小瓶。 标准稀释液或零标准液：10毫升（1瓶）。 四、在检测中需要而没有提供的器材 酶标仪：（450±10NM） 精密移液器：10至100微升 冷藏箱 贮藏条件 未开封的试剂盒应该贮藏在2-8℃的环境下，这样才能保持其活性的稳定，不要使用过期的试剂。其它配套试剂也应该放在2-8℃的环境下保存。一旦打开，必须重新密封好。密封在包装袋中的包被条，其免疫活性在6周内是稳定的。 样品的采集与准备 孕马血清或血浆可用此试剂进行检测。如果样品不能立即进行检测，则应放置于零下20℃的环境下保存（可保存2年）。将血清或血浆用零标准液（或生理盐水，老师讲课时补充提到）按照1：100的比例稀释，可以消除PMSG与LH 、FSH之间的交叉反应。 样品稀释 如果样品的浓度（估计值）高于第5号标准品的浓度（80u iU)，则应用零标准液稀释之。对于来自于怀孕母马的血清样品，我们建议你至少要稀释10倍。 操作步骤 将所需数目的包被条置于板架上。 将100微升标准品，按照浓度梯度顺序加入到相应的微孔中。 将受检样品各100微升加入到相应的微孔中。 在室温的条件下，孵育60分钟。 快速倒掉微孔中的液体。 用蒸馏水冲洗三次，每冲洗一次，都要用吸水纸拍干。 在每一个微孔中加入100微升酶联物。 在室温的环境中孵育60分钟。 快速倒掉微孔中的液体。 用蒸馏水冲洗五次，每冲洗一次，都要用吸水纸拍干。 在每一微孔中加入100微升底物液（显示剂）。 在室温的环境中孵育30分钟。 在每一个微孔中加入50微升终止液，以终止酶联反应。随后在30分钟内，在酶标仪450+10NM处读取OD值。 计算结果 只要在450+10NM处可读数的酶标仪，都可以应用于检测。每一个样品的PMSG浓度都可以按照以下方法获取： 以标准品的平均OD值为Y轴，其浓度为X 轴，做出标准曲线。 用每一样品的OD值，找出对应在标准曲线上的PMSG值，再乘以稀释倍数，即可以得样品的实际单位数。 转换系数： 1