生物制药第五章核酸类药物.ppt

2、生产工艺 酶-化学合成法 必威体育精装版的阿糖腺苷的合成法是酶-化学合成法：用尿苷为原料经氧氯化磷和二甲基甲酰胺反应，生成氧桥化合物，在碱性水溶液中水解成阿糖尿苷，然后利用阿糖尿苷中的阿拉伯糖经酶法转化成阿糖腺苷。 经选育从阿糖尿苷酶法合成阿糖腺苷的优秀菌株是产气肠杆菌（Enterbacteraerogens），这株菌能产生尿苷磷酸化酶（Upase）和嘌呤核苷磷酸化酶（Pynpase），用这个菌株的休止细胞作为酶源，从阿糖尿苷和腺嘌呤能高效地合成阿糖腺苷，菌体也可制成固定化细胞进行连续生产。 3、作用与用途 阿糖腺苷是近年来引人注目的广谱DNA病毒抑制剂，对单纯疱疹Ⅰ、Ⅱ型，带状疱疹，巨细，牛痘等DNA病毒，在体内外都有明显抑制作用。目前认为，阿糖腺苷是治疗单纯疱疹脑炎最好的抗病毒药物。 阿糖腺苷在体内受激酶作用生成的阿糖腺三磷，是脱氧腺三磷（dATP）的拮抗物，从而阻抑了以dATP为底物的病毒DNA聚合酶的活力。而且阿糖腺三磷对于病毒DNA聚合酶的亲和性比宿主细胞的同一个酶的亲和性高。因此这个药物对于抑制病毒具有较高选择性。 （三）三氮唑核苷 1、结构与性质 三氮唑核苷商品名病毒唑，对DNA病毒，RNA病毒都有广泛作用。本品为白色结晶，熔点174～176℃，易溶于水。 这个化合物经X线解析，它的立体结构与腺苷、鸟苷非常类似，在体内被磷酸化成三氮唑核苷酸，抑制肌苷酸脱氢酶阻断鸟苷酸的生物合成，从而抑制病毒DNA合成。它的另一特点是对病毒作用点多，不易使病毒产生抗药性。 2、生产工艺 酶合成法 使用产气肠杆菌，以（尿苷）肌苷和TCA为底物可以用酶法简易地合成三氮唑核苷。 采用前段与后段由两个不同的酶催化，即前段使用嘧啶核苷磷酸化酶，后段使用嘌呤核苷磷酸化酶。 （四）阿糖胞苷（Cytarabine，Cytosine arabinoside，Arabinosyl Cytosine，Aracytidine） ?1、结构与性质 阿糖胞苷又称胞嘧啶阿拉伯糖苷，糖的组成部分是阿拉伯糖。白色或类自色结晶性粉末，无臭，易溶于水，略溶于甲醇、乙醇中，乙醚中极微溶。 阿糖胞苷进入体内转变为阿糖胞苷酸，抑制DNA聚合酶，阻止胞二磷转变为脱氧胞二磷从而抑制DNA的合成，干扰DNA病毒繁殖和肿瘤细胞增殖。只能注射。 2、生产工艺 以5＇－CMP为原料的合成法 （1）工艺路线： （2）工艺过程： ?①水解：并加入处理好的6.5L 氢氧化镧凝胶，总体积为7.5L，升温至90℃，在不断搅拌下，于pH9下进行水解。在不同的反应时间内，均匀取出2mL凝胶溶液，离心分离，取上清液5至10μl，pH9.2电泳分析，检查水解程度。 ②氧桥化：氧桥化后总OD光谱高峰位置移至264nm（pH2） ③氨解：使氧桥断裂3‘，5’-乙酰基脱落 。 ④成盐： 2％盐酸-甲醇 以葡萄糖酸钙为原料的合成路线 （五）聚肌胞苷酸（聚肌胞）（Poyinosinic，Polycytidylic Acid，Poly1：C） 1、结构与性质 1967年美国人Field发现聚肌胞是干扰素诱导物，而且具有广谱抗病毒作用。本品是人工合成的干扰素诱导剂，系由多聚肌苷酸和多聚胞苷酸组成的双股多聚核苷酸。本品可溶于0.85％氯化钠溶液。 2、生产工艺 70年代中期我国开始研制聚肌胞，其生产工艺如下： 底物5-核苷二磷酸吡啶盐的制备 （3）固定化多核苷酸磷酸化酶，将分离纯化的酶液滴加入冰浴中的载体，得到共价结合的固定化多核苷酸磷酸化。 3、Poly I：C制备 （1）底物预处理：CDP吡啶盐转成锂盐，IDP转成钠盐。 （2）酶促反应： （每毫升反应液含μmol／L数）IDP或CDP 15；Tris 150；MgC126；EDTA 1；聚合酶5单位，pH9.0，37℃，3～4小时。用盐酸调pH1.5～2.0，使PolyI（或Poly C）沉淀，立即离心。此后在磷酸液冲液中溶解，等摩尔Poly I与Poly C混合，生成产品 。 ? 3、作用与用途 本品具有抗病毒，抗肿瘤，增强淋巴细胞免疫功能和抑制核酸代谢等作用。本品注入人体诱导产生干扰素。 临床已试用于肿瘤、血液病、病毒性肝炎及痘类毒性感染等多种疾患。 * 1874年瑞士化学家米歇尔，但DNA是否与遗传有关，仍不得而知 * （一）RNA的提取与制备 发酵法生产高含量RNA酵母及其RNA提取工艺流程见右图。 （一）RNA的提取与制备 3．用工业废水培养高含量RNA酵母 使用工业废水培养高含量RNA酵母减少环境污染，降低粮食消耗，如味精生产废水中的成份基本上可供酵母生长。 （一）RNA的提取与制备 4.RNA提取实例