MALDITOFMS的原理和应用1226.ppt

Bruker Confidential 生物质谱仪的离子源与质量分析器 离子源 ElectroSpray Ionization (ESI) Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI) 生物质谱仪的类型 E=U·z=1/2mv2 和 t=L/V E：离子在加速电场获得的动能; U：加速电场电压 z：离子所带电荷; m：离子质量 v：离子飞行速度; L：飞行管道长度 t：离子飞行时间; c：常数 质量分析范围：500Da---100KDa 多肽的序列分析 高灵敏度，分析浓度至低 fmol 软电离方式，主要产生单电荷离子，谱图易解析 能容忍一定的盐浓度：PBS 20 mM 线性TOF分析器可测定大分子的分子量 反射式TOF具有高分辨率, 可进行PMF分析 通过串联质谱可进行序列分析 BSA的氨基酸序列 基于二维电泳分离的蛋白质鉴定 LC-MALDI: 基于液相色谱分离的蛋白质鉴定 细菌鉴定结果的报告 血清多肽谱的分析流程 疾病诊断结果的报告 SNP 位点的检测原理 SNP位点检测的质谱图 如何快速鉴别不同种类的微生物？ BioTyper：微生物的鉴别与分类 待检样品 克隆选择 样品制备 质谱分析 数据分析 菌种鉴定 ? Bacillus globigii Profiling results from different Bacillus strains -6000 -4000 -2000 0 2000 4000 6000 a.i. B. globigii B. licheniformis B. subtilis B. thuringiensis 实验流程 Result Report | Detected Species | Ranking |act Sc |max Sc |Rel Score |PN k |PN b |PN m |Rel P-Num.|I-Corr.|1000*Pro --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- Spectrum #12 | Ps. mendocina DSM50017 | 1 | 3813 | 4271 | 0.89 | 41 | 10 | 83 | 0.55 | 0.88 | 438 | Ps. oleovorans B396 | 2 | 1671 | 3450 | 0.48 | 14 | 8 | 83 | 0.22 | 0.39 | 41 | Ps. fluoreszens B340 | 3 | 868 | 4186 | 0.21 | 6 | 7 | 83 | 0.11 | 0.19 | 4 | Ps. veronii DSM11331 | 4 | 847 | 4250 | 0.20 | 5 | 7 | 83 | 0.10 | 0.14 | 3 | Ps. putida DSM291 | 5 | 374 | 2821 | 0.13 | 3 | 3 | 83 | 0.05 | 0.12 | 1 | Ps. putida B401 | 6 | 329 | 2638 | 0.12 | 3 | 2 | 83 | 0.05 | 0.11 | 1 基于谱图模式比对的细菌鉴定 MALDI-TOF质谱的基本原理 蛋白鉴定和蛋白质组分析 定量蛋白质组学 细菌鉴定 血清多肽谱分析 分子成像 内容提要 患者 血清样品 磁珠分离过程 数据分析 临床结果 * * * 疾病 正常 正常 Binding Washing Elution MALDI TOF检测 可选择的磁珠类型 Hydrophobic Interaction MB-HIC 1 MB-HIC 3MB-HIC 8MB-HIC 18 Immob