文档分离技术.doc

成分的提取分离和中药新药的开发研制，具有吸附快，吸附容量大，洗脱率高，树脂再生简单等优点，尤其适合于分离纯化黄酮类、皂苷类等成分及其大规模生产刘延吉等用AB一8型大孔树脂分离纯化南果梨黄酮类化合物，室温下最佳纯化条件为上样液为原液，上样流速为1．0mL／min，三倍柱床体积的50％乙醇洗脱，洗脱流速2．0mL／min，纯化后得率为51．16％。? ? 3.5梯度pH萃取法? pH梯度萃取适合分离酸性强弱不同的游离黄酮类化合物的分离，根据黄酮类苷元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质，可以将混合物溶于有机溶剂(如乙醚)后，依次用5％碳酸氢钠(萃取出7、4’-二羟基黄酮)、5％的碳酸钠(萃取出7-羟基黄酮或4’-轻基黄酮)、0．2％氢氧化钠(萃取出一般酚羟基黄酮)、40％氢氧化钠(萃取出5-羟基黄酮)萃取而达到分离的目的[11]。? 3.6铅盐沉淀法? 将粗提取液蒸干，残渣用水溶解，水溶液中加醋酸铅饱和水溶液以沉淀其中的杂质，滤去沉淀，溶液通硫化氢脱铅，减压浓缩放置，有时能析出苷；否则可浓缩至干，浓缩物选用适当的有机溶剂如甲醇、乙醇、乙酸乙酯萃取，必要时加活性炭处理，提取液浓缩后放置，有时也可得粗苷。? 3.7高效液相色谱(HPLC)分离法? HPLC法在分析测定黄酮类化合物方面起着重要作用。随着色谱技术的不断发展，应用HPLC分离技术己分离了多种黄酮化合物。近年来，对低极性苷元利用反相系统进行分离研究，对极性较大的苷元一般用C18或C8柱的反相系统分离。在分离中较困难的是对含有较多组分的复杂黄酮类化合物的分离。? 自20世纪70年代以来，超临界流体技术已经取得长足的进展。超临界流体技 术正以其独特的优点受到关注，并在萃取、化学反应、材料制备等方面得到广泛的应用。超临界萃取技术早己实现工业化，目前的趋势是向大规模、高附加值和套装工艺方向发展。在国内外，超临界流体技术还广泛用于高分子聚合、有机反应、酶催化反应、材料制备等方面，目前各类报道颇多，但产业化的技术却为数不多，有望在不久的将来能形成规模生产，得到实际应用[12]。超临界流体技术以绿色、环保而受到人们的关注，它为绿色化学提供了全新的反应体系，相信超临界流体技术必将得到迅速发展，应用也将有广阔的前景。? 4生物分离的目的? 生物分离技术研究的目的是要缩短整个下游工程的流程和提高单项操作的效率，以前的那种零敲碎打的做法，既费时、费力，效果又不明显，跟不上发展的步伐。现在对整个生物分离过程的研究要有一个质的转变，并认为可以从两个方面着手，其一，继续研究和完善一些适用于生化工程的新型分离技术；其二，进行各种分离技术的高效集成化。目前出现的新型单元分离技术，如亲和法、双水相分配技术、逆胶束法、液膜法、各类高效层析法等，就是方向一的研究成果，而作为方向二的高效集成化，目前研究比较热门的是将双水相分配技术与亲和法结合而形成效率更高，选择性更强的双水相亲和分配组合技术，将亲和色谱及膜分离结合的亲和膜分离技术；可以将离心的处理量、超滤的浓缩效能及层析的纯化能力合而为一的扩张床吸附技术等。? 目前看来，有关生物分离技术或过程的高效集成化研究还是很肤浅的，还不能与传统技术及过程的有效比较，尚未大规模应用[13]。研究的目标产物液大多是局限在简单分子，对于基因工程蛋白质及其有重要应用价值的其它生物活性物质的分离则研究得很少，对有关新技术的分离机理、控制因素、模型化等方面的研究也还处于初步摸索阶段。但是应该看到研制和发展生物分离过程的高效集成化技术是改进和优化生物下游处理过程的重要手段之一，也是生物工程在二十一世纪得到高度发展的重要保证，这种集成化技术不仅会加强和改善发酵液和基因工程菌培养液的分离手段，而且对天然物质中高价值的有效物质提取和分离过程的改进也会有明显的指导意义和借鉴作用。因此，生物分离过程的高效集成化的现实作用相当重大，潜在的发展前景是十分美好的[14]。? 5.玫瑰花中黄酮类化合物分离目前成果? 料液比从1：20到1：30时，黄酮提取率增长较快，从l：30到l：50时，黄酮的提取率增长缓慢，料液比达到1：50后，提取率趋于平稳。可能原因一是随着料液比的增加，原料中的可溶性黄酮已经全部溶出：另一原因是随着提取液用量的增加，提取液对微波的吸收增加，原料对微波的吸收相对减少，从而导致提取率趋于平稳。? 通过Sephadex?LH一20的初步分离、HPLC的分离和紫外吸收光谱的分析，可以确定玫瑰花黄酮类化合物中至少有五种黄酮单体，经鉴定其中有木犀草素，此前未见文献有报道，由于实验条件和实验时问限制，其他四种单体只能确定是黄酮类化合物，没有鉴定出具体的黄酮单体，还需要经过质谱、核磁共振等其他分析手段进行鉴定。? AB-8、D101树脂对玫瑰花黄酮的吸附均为快速平衡型，在5h后基本达到平衡