土壤水解酶测定方法.doc

土壤酶测定方法——荧光微型板酶检测技术（microplate fluorimetric assay） 所测酶类： 碳水化合物分解酶类（纤维素、淀粉、半纤维素）： α-Glucosidase a-葡萄苷酶 β-Glucosidase b-葡萄苷酶（E.C.3.2.1.21） β-Cellobiosidase β-纤维二糖- Xylosidase β-木糖苷酶（E.C.3.2.1.37） N-Acetyl-glucosamidase 乙酰氨基葡萄糖苷酶（几丁质酶）（E.C.3.2.1.52） 有机氮分解酶类（蛋白质、尿素）： Aminopeptidases 氨肽基酶leucine-aminopeptidase（蛋白酶之一） （E.C.3.4.11.X） Urease 尿酶 有机磷分解酶类： Phosphatase 磷酸酶（E.C.3.1.3.1 and 3.1.3.2） 有机硫分解酶类： Sulfatase 硫酸酯酶E.C.3.1.6.1 氧化还原酶类： Peroxidase 过氧化物酶 （加双氧水） phenol oxidase 酚氧化酶 实验材料和药品： 1. 500ml的烧杯10个 2. 移液器 3. 排枪（10-100ul, 30-300υL） 4. 磁力搅拌器 5. 96孔微型板（黒、白板） 6. ｖ型槽 7 .酶标仪 标准底物： 4-methylumbelliferone(MUB)　　　　　　　　　　 　　 7-amino-4- methylcoumarin(AMC) 荧光底物: 4-MUB-phosphate 4-MUB-sulfate potassium salt 4-MUB-β-D-glucoside 4-MUB-β-D-cellobioside 4-MUB-N-acetyl-β-D-glucosaminide 4-MUB-β-D-xyloside 4-MUB-α-D-glucoside L-Leucine-7-amino-4-methylcoumarin 非荧光底物： L-dopa （三）试剂准备 1. 醋酸钠缓冲液2L 8.003g无水醋酸钠溶液加水1L，用醋酸调pH到土壤pH，再定容到2L。 2. 5mL底物浓度为2mM（10×）所需底物质量mg 1 4-MUB-phosphate 2.56 水 2 4-MUB-sulfate potassium salt 2.94 3 4-MUB-β-D-glucoside 3.38 水 4 4-MUB-β-D-cellobioside 5.00 水 5 4-MUB-N-acetyl-β-D-glucosaminide 3.79 1mlDMF二甲基甲酰胺+水 6 4-MUB-β-D-xyloside 3.08 水 7 4-MUB-α-D-glucoside 3.38 1ml吡啶+水 8 L-Leucine-7-amido-4-methylcoumarin 3.25 1ml乙醇+水 水