05第五章 致病性测定.ppt

第五章 致病性测定 一、意义 病株上分离到的微生物，确定它的致病性，是一种植物病害鉴定的关键。 一般来说，致病性的和腐生性的微生物很难从形态学和其他性状上区别的。 接种试验是植物病害研究最重要的工作。 早期主要是确定一种病原物的致病性，证明它是一种病害的病原物， 后来扩展到研究植物病害的各个领域 侵染过程、病害循环、病原物致病性的分化、植物对病原物抗性、病害流行、损失估计和病害控制的。 如何确定微生物是病原生物 通常采用柯赫法则（Kochs Postulates） （Robert Koch，1884 1890 ） 植物病害病原生物学说的确立，对植物病理学的发展是非常重要的。 柯赫法则有三条（Robert Koch，1884 1890 ） 某种微生物经常与某种病害有联系，发生这种病害往往就有这种微生物的存在； 从病组织上可以分离到这种微生物的纯培养，并且可以在各种培养基上研究它的性状； 将培养的菌种接种在健全的寄主上，可诱发与原来相同的病害。 植物病原细菌学的创始人史密斯（Smith， 1905 ）又补充了一条。 从接种后发病的植物上，能再分离到原来的微生物。 柯赫法则是有普遍指导意义 即使有许多植物的病原物如专性寄生真菌、植物的病毒和类病毒、类菌原体和有些植物寄生线虫还不能在人工培养基上培养，但是只要稍作修改也是可行的。 例如小麦锈菌可以分离单个夏孢子，接种在小麦叶片上培养和繁殖。 植物的病毒和类菌原体等也可以在植物上培养和纯化，观察所表现的症状。 在鉴定一种病害的病原物时，要分清主次。 植物病毒病由二种以上病毒引起的复合侵染是较常见的。 至于其他病原物引起的病害，一种病害只有一种病原物，即使可能发现两种病原物，也有主次之分。 二、过敏性反应 分离到的大量菌种哪些是致病性的，用常规接种方法比较费事，有的要经过相当长的时间。 过敏性反应可以用来快速筛选致病性微生物。 真菌：提取毒素，注射，将出现过敏性枯斑 细菌：接种细菌悬浮液，致病性细菌将出现过敏性枯斑，腐生性细菌则不表现 如：注射Pseudomonas属细菌的，一般在6-10h即出现枯斑，注射Xanthomonas属细菌的要10-24h。 注意： 过敏性反应的测定只能作为一种参考性状，可初步区别分离到的菌种是否为致病性的，致病性的最后确定，还要用常规的接种方法。 致病性细菌在非寄主植物上也可发生过敏性反应，对一种病原细菌的寄主范围也要作具体分析。 三、常规接种测定 接种物的准备 活化：注意菌龄，菌龄老则致病力显著减退 一定数量（包括浓度）：有的需要高浓度，有的不需要 田间的病组织：不可培养的病原菌 取新发病的病组织 媒介：虫传病害 接种方法 在进行试验以前，对一种病害在自然条件下的传染方式和侵染途径有所了解对工作是非常必要的。 病害的种类很多，其传染方式也各不相同，因此要用相应的接种方法。 接种方法很多，采用哪种方法要符合实验的要求。 植物病害的病原物的种类很多，各有其特殊的接种方法 。种子、土壤、气流和昆虫等传染的病害，接种方法是不同的。 植物病原细菌和真菌的接种 种子传染病害的接种 拌种法：通常采用黑粉病 但是大麦和小麦的散黑穗病，病菌潜伏在种子的胚部，要在花期接种。 浸种法：系统性侵染病害 细菌悬浮液与种子一起浸泡，播种。 土壤传染病害的接种 土壤接种法 ： 将病菌在播种前或播种时拌在土壤中，注意尽可能不要将有机质带入土壤。 土壤灭菌与否将影响接种的结果。 接种灭菌土壤的一般发病率较高，但也有相反的现象。 土壤接种问题最为复杂，主要的原因就是病菌受到土壤物理、化学及生物学性质的影响，微生物之间的相互关系更加复杂。 蘸根接种法 蘸根接种法是将幼苗的根部稍加损伤，在孢子或菌丝体悬浮液中浸过以后移植。 优点：使病菌与根部直接接触，受土壤微生物的影响比较小，根部病菌也容易侵入有损伤的根，效果比一般土壤接种法好。 根部切伤接种法 将移植铲或其他器具在植株的附近插入土壤中，使植株的根部部分受到损伤，然后将孢子或菌丝体的悬浮液灌注在根部附近的土壤中，最好从移植铲插入的空隙中灌入。 气流和雨水传播病害的接种 喷雾法 将孢子（或菌丝）悬浮液喷洒在寄主表面，常用于接种由气流和雨水传播的病害。 病菌可以从气孔、伤口或表皮直接侵入。对于从气孔侵入的病菌，则应注意喷洒叶背，叶背气孔的数目一般比叶正面的多。 对于伤口侵入的病菌，喷洒前应先将寄主表面稍微损伤。 用细的砂土或金刚砂摩擦叶面。 用湿布将蜡质层擦去 喷洒时在孢子悬浮液中加入适当的展布剂（如加0.1％的肥皂等）。 喷撒法 用于接种锈菌和白粉菌，可将干的病菌孢子喷撒在潮湿的植物表面上。 涂抹法 接种麦类锈菌，由于寄主表面和锈菌孢子都不易沾湿（不宜用喷洒法接种），先用手指沾水摩擦叶片，使表面有