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绪 论 什么是病毒？ 一类由核酸和蛋白质等成份组成的非细胞型微生物，以感染和非感染两种状态存在，其本质是一类只含DNA或RNA的遗传因子。 病毒基本特点: 形态微小(nm),通过滤菌器 无细胞结构,主要含核酸和蛋白质 活细胞寄生 仅含一种核酸类型(DNA或RNA) 以复制为增殖方式 感染性和整合性 对抗生素敏感 病毒的大小 直径20 －300nm 电镜观察 病毒的形态 病毒的结构 基本结构 核心：核酸 衣壳：蛋白质 包膜： 病毒的增殖 病毒增殖周期: 吸附 穿入 脱壳 生物合成 组装、成熟和释放 病毒学检验的概念 对临床和流行病学标本(血液、尿、粪便、组织液） 病毒的定性和定量检测分析 为疾病的诊断、治疗和预防提供依据。 一、病毒学及检验的发展 病毒的发现 公元11世纪宋朝用“人痘苗”预防天花，18世纪英国医生琴纳开创用“牛痘苗”预防天花，效果良好； 1892年，俄国伊凡诺夫斯基发现烟草花叶病毒； 1898年，荷兰贝杰克林建立了病毒的概念； 1892年，德国学者发现了第一个动物病毒：口蹄疫病毒； 1917年，发现了能裂解痢疾杆菌的噬菌体。 活的宿主细胞分离病毒： 分离植物病毒（如小麦、黄瓜等）； 用猴子分离脊髓灰质炎病毒； 1901年，美国Walter Reed 通过人体实验发现了黄热病毒经蚊传播，1927年Stokes 用恒河猴分离到了黄热病毒，1936年Theiler制备了疫苗； 鸡胚接种技术发展 1933年澳大利亚伯内特分离了流感病毒，之后研制流感疫苗； 培养其他病毒如天花病毒等。 细胞培养技术应用： 1943年，我国黄祯祥用鸡胚细胞进行病毒的传代、滴定及中和试验； 1949年，Enders用人原代细胞培养脊髓灰质炎病毒并制备了灭活疫苗； 1952年Dulbecco利用病毒空斑试验测定了病毒滴度。 分离了许多其他病毒（流感、副流感、腺病毒、柯萨奇病毒）。 免疫学方法应用 1914年，Ggeorge Hirst用血凝试验和血凝抑制试验检测流感病毒； 病毒中和试验、补体结合试验检测病毒的抗原和抗体； 20世纪60年代，IFA、ELISA、WB、放射免疫技术应用。 病毒结构和化学研究 1932年，德国科学家Ruska和Knoll研制第一台电子显微镜; 1939年Kansche观测到烟草花叶病毒; 50年代，用X-射线晶体衍射技术发现病毒两基本结构：螺旋形和20面体； 病毒化学结构：1933年美国化学家Stanley发现病毒的侵染性能被胃蛋白酶破坏，证明病毒含有蛋白质，后又发现含有核酸。 分子病毒学的发展 PCR扩增技术 DNA测序技术 基因工程：干扰素、疫苗、病毒检测 新发病毒： 类病毒 拟病毒 朊病毒 二、病毒检验内容及范围 病毒学检验内容 病毒或病毒产物的直接检测 电子显微镜技术：可用于粪便肠道病毒快检，如腺病毒、轮状病毒、诺瓦克样病毒。免疫电镜更特异和敏感； 病毒包涵体的检查：用姬姆萨染色和伊红染色； 核内包涵体：如HSV、VZV、CMV等出现嗜酸或嗜碱包涵体； 胞浆包涵体：如狂犬病毒的内基氏小体。 病毒抗原的检测 组织细胞中抗原：免疫酶、免疫荧光； 血清中抗原：ELISA、放射免疫； 多肽抗原:WB。 病毒基因的检测 核酸杂交：以同位素标记与目的基因互补的核酸序列为探针； PCR测DNA RT-PCR测RNA 病毒的分离：诊断病毒的“金标准” 用敏感的细胞、鸡胚和实验动物 病毒全基因序列的克隆: 分析病毒ORF编码蛋白的功能 制备诊断试剂或疫苗：如乙肝病毒 血清学/免疫学诊断：测抗体 中和试验、血凝试验和血凝抑制、补体结合试验 现代免疫技术 （二）病毒学检验的应用范围 病毒感染和病毒性疾病的诊断 临床病毒性疾病的诊断： 病毒传染病疫区病人的诊断： 病毒性疾病高危人群筛检：饮食和娱乐行业检测甲肝、乙肝、HIV。 献血员的筛选：测ALT、HBsAg、HCV、HIV、梅毒抗体。 动物传染源和节肢动物的检测 应采集动物和节肢动物标本，如肾综合症出血热病毒，取黑线姬鼠，再用细胞分离病毒。 新发病毒的诊断 如SARS，禽流感，埃博拉病等。 病毒变异的研究 根据病毒变异可将病毒划分不同的血清型 如流感病毒据HA和NA分H1-15,N1-9 乙肝病毒表面抗原的adyw,分为9个血清型 病毒传染病的监测 流感病毒监测网主要任务是： 分离病毒，确定型别，评估抗原是否变异 及时分离流行株并提供疫苗株 探讨流感病毒的生态学和自然史 提供标准抗原抗体，以便各地及时监测 病毒型人兽共患病的检疫 禽流感、疯牛病、狂犬病 如1997年禽流感导致30万只鸡和12人死亡 1985年英国发现首例疯牛病，后导致上千万只牛感染。 三、病毒检验一般原则 完善的实验设计 实验目的和意义