4-微生物限度检查方法和验证.ppt

Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 微生物检查的主要影响因素： 在药品微生物学检验中，检验结果主要受以下因素影响， ① 药品本身的抑菌性； ② 培养基的促菌生长能力； ③ 培养条件(温度、湿度及需氧或厌氧)； ④ 过滤系统的材质。 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 其中抑菌因素由于其特殊的重要性而备受关注，因此在微生物检验方法的验证（包括细菌、霉菌及酵母菌计数方法、控制菌检查和无菌实验方法）中尤其重要，也是法规审计中的重点关注点，本部分将着重对其介绍。 微生物培养条件也是影响供试品中菌检计数准确与否的重要因素。应注意影响结果的两个方面：一是培养基本身的性质；二是培养条件。通俗说来，培养基应具备应广谱性，即有助于供试品中所有存活微生物的生长。另外，应注意采用最佳培养条件，以确保微生物充分生长并使计数结果呈现良好的重现性。 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 消除抑菌性的方法： 消除药品抑菌性常见的方法有：化学中和法、稀释法和薄膜过滤淋洗法。根据产品的具体情况，也可将此三 种方法适当组合使用。 1. 化学中和法 当产品具有抑菌作用时，选用一定的化学中和剂，加入其中，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作用。有些化学中和剂在有效消除抑菌作用的同时，对微生物有轻微的伤害作用，这点应在验证过程中注意。 搞清产品是否具有抑菌作用是检验方法验证的先决条件。根据检品抑菌作用的大小和药典的通则要求，需设计方案，通过试验确认化学中和剂的浓度、加量及其他有关的检验条件。 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 消除抑菌性的方法（续）： 抗生素对化学抑制剂并不敏感，在无菌检查中，应根据具体品种采用不同的酶(如青霉素酶)将抗生素活性破坏后，方能进行检验。这类方法均须验证。 2. 消除产品抑菌性的第二种方法是稀释。实验表明，化学抑菌剂的浓度与其抑菌效果相关。不同抑菌剂在不同浓度下的抑菌作用各不相同。但对某一特定的抑菌剂来说，抑菌剂浓度与抑菌效率呈指数关系。 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 消除抑菌性的方法（续）： 3. 薄膜过滤法 在药品微生物学检验中，尤其是无菌检查，常用薄膜过滤法来消除产品的抑菌性。该法基本原理是当抑菌产品通过滤膜时，微生物被截留在滤膜上，具有抑菌作用的药品被过滤掉，过滤过程消除了药品的抑菌作用。经过滤后，将滤膜置于通常为l00ml的特定培养基内，在适当的条件下培养，观察其是否有微生物生长。 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 消除抑菌性的方法（续）： 残留于滤膜上的抑菌剂仍有一定的抑菌作用，因此，应尽可能采用对检品具有低吸附性的滤膜(如聚偏四氟乙烯)，以便减少抑菌作用；此外，可通过稀释防腐剂或淋洗滤膜的方式来进一步消除残留物的抑菌作用。所用的稀释液或淋洗液应比较温和，如0.1％的蛋白胨水溶液。当淋洗液中需添加化学中和剂时，要保证滤膜上的残留物对截留在滤膜上所有微生物的生长无不良影响。 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 消除抑菌性方法的验证： 一、化学中和法 （一）试验方法 按照下列要求配置三组样品： 1. 样品组―― 按照常规药品的微生物检验法进行，加入抑菌中和剂，最后接入已知量的菌株(少于100 个菌)，培养计数。 2. 对照组――用蛋白胨代替药品，即以0.1%的蛋白胨溶液作为供试品，菌株接种操作同样品组。 3. 菌种活性检查组――不加抑菌中和剂，将试验菌株直接接种培养。 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 消除抑菌性方法的验证（续）： （二）合格标准 在确定药品抑菌消除方法的验证合格标准时，需兼顾中和剂的效力和毒性两个方面。验证试验的数据应能证明所采用的中和法能有效消除药品的抑菌力(中和剂的效力)，与此同时，它对微生物的正常生长应无不良影响 (中和剂的毒性)。达到了这两方面的要