[工学]木质素的紫外光谱分析.ppt

在大部分的样品类型中，分光光度计可接受样品孔、小玻璃管、吸浆管和微孔板。微孔板主要是满足高通量的需要和大规模的实验室需求。但尽管对于小实验室来说，制造商仍然提供了多种容器转换器来满足通量的要求和减少实验时间。用小试管装样品容量一般从1 μL-5mL，并且一些仪器装备了各种样品固定物来满足各种改变需要。 大部分单机型的分光光度计包含了驱动仪器运行和管理数据的软件。高性能的仪器，通常与PC机一起联用，制造商会提供额外的软件。同时用户也可以选择升级软件以满足他们的需要。 定量分析 分光光度法常用于定量测定，根据Lambert-Beer定律，在一定波长条件下，吸光度与浓度成正比，因此在分光光度计上测出吸光度，通过下列方法即可求出被测物质含量: 1. 标准曲线法 在测定溶液吸光度时，为了消除溶剂或其它物质对入射光的吸收，以及光在溶液中的散射和吸收池界面对光的反射等与被测物吸收无关的因素的影响，必须采用空白溶液(又称参比溶液)作对照。常用的空白溶液有下列三种。①溶剂空白 ②试剂空白 ③试样空白 2. 标准对照法 先配制一个与被测溶液浓度相近的标准溶液(其浓度用cs表示)，在?max处测出吸光度As，在相同条件下测出试样溶液的吸光度Ax，则试样溶液浓度cs可按下式求得： cx = cs Ax/As 分光光度计的主要性能指标及其检查方法 分光光度计的主要性能指标一般包括以下几项：波长范围、波长准确度、波长重复性、谱带半宽度、杂散光、分辨率、光度准确度、光度计线性、光度计重复性、噪音、基线稳定性。 1. 波长范围 波长范围是指仪器上、下限波长之间的工作范围，是与光源、单色器及探测器的光谱响应特性有关的。有的仪器在波长范围两端缺乏足够的能量，不能正常工作，表现为100％T或0A设定困难，基线两端不平直等。 2.波长准确度 波长准确度是指仪器波长指示器上所指示的波长值与仪器出射的实际波长值之间的符合程度，可用二者之差(即波长误差)来衡量其准确性。 常用的检查方法有：(1)用氘灯(或氢灯)的辉线检查；(2)用汞灯的辉线检查；(3)用标准玻璃滤光片检查；(4)用样品溶液的吸收光谱检查。 3.波长重复性 用一个已知样品吸收峰或灯的辉线作标准，在相同条件下多次重复读取峰位。计算每次观察的波长对平均值的偏差，这些偏差的平均值就是此分光光度计的波长重复性 4. 谱带半宽度 谱带半宽度又称有效带宽。这里是指离开单色器的出射狭缝的辐射光谱的峰高的一半处的谱带宽度。一般地讲, 谱带半宽度较窄时, 有利于提高仪器分辨率. 采用较窄的狭缝, 可以使谱带半宽度变窄。 5.杂散光 杂散光是指由检测器接收到的任何内仪器单色器分离的光谱范围以外的辐射。分光光度计杂散光强度的测量，通常采用在规定波长下几乎完全不透明的溶液或滤光片插入仪器，检测仪器给出的透射率值。紫外区可用NaI溶液测定波长为220nm处的杂散光，在可见区可用各种有色玻璃截止滤光片。 6. 分辨率 分辨率是指仪器对于紧密相邻的峰可分辨的最波长间隔，是衡量分光光度计性能的重要指标之一。单色器输出的单色光的光谱纯度、强度以及检测器的光谱灵敏度等是影响仪器分辨牢的主要因素。 分辨率的测试方法有许多种，这些方法的原理都是观察刚可分辨的最小波长间隔，在不同被长范围使用的材料及方法皆不同。 7. 光度准确度 光度准确度是指仪器在吸收峰值上读出的透光度(或吸光度)与已知真实透光度之间的偏差。要测得正确可靠的数据取决于以下几方面因素：(1)样品质量，(2)制样技术，(3)仪器的性能和操作条件的选择，(4)吸收池的质量。光度误差是一个综合性的误差。为了检定光度准确性，必须有一定的标准样品. 已有许多测试方法和参考标准供参考，一类是标准溶液法，另一类是滤光片法。 8. 光度计线性 光度计线性是用这个分光光度计测量时，对遵守比尔定律的溶液能给出一个吸光度对浓度(A对C)的线性曲线。 检查光度计线性可用溶液稀释法、吸收池光径法、中性滤光片叠加法。 9光度计重复性 光度计重复性是在相同的仪器上，相同条件下对同一样品进行多次重复测定（透光度或吸光度）。计算每次读数对平均值的偏差和这些偏差的平均值。 10.噪音 噪音是信号随时间而无规则的变化。噪音测量的方法是在仪器预热稳定后，在一定波长和一定缝宽下，扫描100％线或0％线数分钟，量取峰－峰之间的值作为绝对噪音水平。但在实际测定中，常用信噪比来描述仪器的性能，如在100％线扫描时，噪音是1％，则信噪比为100：1。 11.基线稳定性 基线稳定性是指双光束分光光度计在扫描100％线或OA线时(样品室中不放任何东西)读数随时间偏离的程度。如果基线稳定性不好，当然会影响光度准确度。 12. 基线平直性 基线平直性是指双光束分光光度计扫描基线(100％线或0A线)(样