讲稿2：薄层色谱法.pptVIP

薄 层 色 谱 法（Thin-layer Chromatography，TLC） 目 录 一 前言 二 基本参数 三 薄层层析的操作 四 特殊的薄层 二. 基本参数 三.薄层色谱的操作 吸附剂的选择 薄层板的制作 展开剂的选择 点样 展开 定位与显色 薄层层析的定量测定 (一) 薄层层析用的吸附剂 常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺等。 吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性质，即它们的溶解性、酸碱性、极性以及是否与吸附剂起化学反应等； 其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及其价格等。 (三)薄层层析中展开剂的选择 主要根据极性的不同来选择流动相展开剂。 各种展开剂按其极性不同排序为： 烷烃烯烃醚类硝基化合物二甲胺酯类酮类醛类硫醇胺类酰胺醇类酚类羧酸 选择薄层条件的简图 Stahl设计的用以选择薄层条件的简图 （1）为被分离化合物的极性（2）为吸附剂的活度（3）为展开剂的极性。若将这三个因素各自固定在圆周的三分之一，转动圆盘正中的三角形，如果角A指向极性物质，则角B指向活度小的吸附剂，角C就指向选用极性展开剂；如转到A’，B’，C’处则又要作另外的选择组合。 极性较大的溶剂可以使化合物在薄层上移动。 极性较小的溶剂降低极性大的溶剂的洗脱能力，使Rf值降低。 中等极性的溶剂往往起着使极性相差较大溶剂混合均匀的作用。 在展开剂中加入少量酸、碱可以使某些极性物质斑点集中，提高分离度。 用粘度太大的溶剂时需要加入一种溶剂以降低展开剂的粘度，加快展开速度。 例如环己烷-丙酮-二乙胺-水（10:5:2:5）这个系统中， 水是极性大的溶剂，环己烷是极性小的溶剂，后者的加入可以降低分离物质的Rf值，丙酮起着混匀整个系统及降低展开剂粘度的作用，少量二乙胺的加入控制了展开剂的pH值以使分离后的斑点不致拖尾，分离清晰。 微量圆环技术 将试样溶液点于已准备好的薄层上，点成同样大小的圆点，用毛细管吸取各种经初步选择认为可能应用的展开剂，加到试样点中心，让展开剂自毛细管中慢慢流出进行展开。 (四) 点 样 1.样品溶液 一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机溶剂，最好用与展开剂极性相似的溶剂溶解试样，配成0.5%~1%的试液。 2.点样量 点样量的多少与薄层的性能、厚薄及显色剂的灵敏度有关。一般来说，样品量最小为几μg，常用量为几至几十μg，制备型的分离可以点样到mg量。总之点样量随分离目的而定。 3.点样方式 最好是直径3—5mm的圆点。 常用的点样方式 4. 点样容器 定容毛细管 微量注射器 点样器 (五) 展 开 1. 水蒸气的影响 2. 溶剂蒸气的影响 3. 展开槽 4. 展开方式 5. 几种新型的展开技术 6. 展开操作 1.水蒸气的影响 在吸附薄层色谱的展开过程中，空气的相对湿度以及展开槽中的水蒸气必须严格控制，微量的水也能对色谱分离结果产生较大的影响。 硅胶薄层板吸附水蒸气的速度很快，0.25mm厚、20×20cm的薄层板在50%相对湿度中约3分钟就失去活性的一半，而15分钟时吸附的水分已达到最大值，因此，点样速度的快慢，空气相对湿度的大小，都可以影响分离以及重现性。 适宜的相对湿度范围也决定于溶质和溶剂的极性。 2. 溶剂蒸气的影响 “边缘效应”：Stahl在用氯仿-甲醇（95：5）为展开剂展开麦角生物碱时发现，对同一种生物碱，在薄层板中部的Rf值比在边缘的Rf值小，称此现象为“边缘效应”（edge effect）。 展开槽中被展开剂蒸气饱和后再进行展开就可以消除。 3.展开槽 普通展开槽 双底展开槽 水平展开槽 4.展开方式 (1)近水平展开：将点样后的薄层板下端浸入展开剂0.5cm，薄层上端垫高使薄层与水平成5-10o的角。 (2)上行展开：将点样后的薄层放在盛有展开剂的直立型的展开槽中，展开剂由薄层下端借毛细管作用上升至前沿。 (3)下行展开 (4)双向展开 6 展开操作 1.展开槽的密闭 目的是使展开槽被展开剂蒸气饱和并使展开剂组成不变。 2.展开槽的饱和 为避免“边缘效应”，在薄层板用展开剂蒸气饱和有时是必要的。 3.展开距离 常规薄层最长展距为20cm;高效薄层展距最长为10cm。 4.展开温度 展距对结果的影响，硅胶HPTLC 分离洋甘菊油，a）3 cm、b）5 cm、c）