大鳞副泥鳅LDH同工酶的发育遗传学研究 A Developmental Genetic Study of LDH Isozymes.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)18(6):6-81996 ·研 究 报 告 · 大鳞副泥鳅LDH同工酶的发育遗传学研究① 肖义军 高建民 傅文庆 湘建师范大学生物工程学院．福州 350007) 摘 要 采用聚丙烯酞胺凝胶电泳技术研究了大鳞副泥鳅早期发育过程受（精后0-227小时）和成体7 种组织器官 脑（、肾、骨骼肌、肠、心、肝和眼）中的LDH同工酶表达状况．结果表明，大鳞副泥鳅 的LDH同工酶具有明显的组织特异性和发育阶段特异性． 关健词 大鳞副泥鳅，LDH同工酶，个休发育谱式，聚丙烯酞胺凝胶电泳 ADevelopmentalGeneticStudyofLDHIsozymes inParamisgurnusdabryanus XiaoYijun GaoJianmin FuWcnqing (BiotechnologicalCollegeofFujianNormalUniversity,Fuzhou350007) Abstract ThepatternofexpressionofLDH isozymeswasinvestigatedinsevendifferentadulttissues (brain,kidney,muscle,intestine,heart,liverandeye)andearlydevelopmentalstagesofParam姗urnus dabryanusby polyacrylamidc gel electrophoresis.TheresultsshowedthattheLDH isozymes ofParamisgurnusdabryanusexhibitedatissue-specificdistributionandanontogcneticchangeclearly. Keywords Param姗urnusdabryanus,LDHisozymes,Ontogeneticpattern,Polyacrylamidegel electrophoresis 许多研究表明，LDH同工酶在成体组织中有特异性分布，在早期发育过程中有阶段特异性表达 ’〔〕，是研 究基因差别性表达的良好工具．大鳞副泥鳅是一种底栖生活的小型鱼类，养M简单，一年四季均可进行人工催产 繁殖，是进行鱼类发育生物学研究的好材料．本文对其LDH同工酶系统的组织器官分布和早期发育过程中的表 达状况进行了初步研究，为研究早期发育过程中基因表达的调控提供了基木资料． I 材 料 和 方 法 1.1材料来源及胚胎孵化 大鳞副泥鳅来自江西南昌，选出健康成熟个体用于实验．人工催产参照林浩然 (4（)的方法，受精卵置于玻璃 培养皿中孵化 水（温26111r)，鱼苗开口以后饲喂蛋黄． 1.2样品制备 将成鱼剪断鳃动脉放血后，取脑、待’、骨骼肌、肠 、心、肝和眼等7种组织，胚胎共取 15个时期．上述材 料各以冷生理盐水洗涤后，组织按 1:5(W/V）的比例，胚胎按50个胚胎/0.5m1加人0.01mol/LPBS ①本文在张健教授指导下完成，谨表谢意！ 6期 肖义军等：大鳞副泥鳅LDH 同工酶的发育遗传学研究 7 (pH7.4)，冰浴中匀浆，匀浆液Lei4℃冰箱内抽提 1-2小时，然后在4CI条件下离心30分钟 3（2000g)，取上清 液置冰箱保存备用． 1.3电泳、染色和扫描 电泳、染色按张龙翔 ”（的方法进行，分离胶浓度7%．加样量 10微升 ／管，稳流1mA／管 10分钟后，稳 压200伏，150分钟．对向阴极迁移的酶带的检测采取正负极反接的方法．部分结果用岛津CS-930双波长扫描 仪进行了扫描分析． 1.4石蜡连续切片 取成休肝脏和从附着器消失期以后的鱼苗．每12小时取材一次，进行石蜡切片观察． 2 结 果 2.1大鳞副泥鳅各组织器官的LDH 同工酶谱 与大多数硬骨鱼一样，大鳞副泥鳅的LDH同工酶山3个基因座位 L（dh-A,Ldh-B,Ldh-C)编码．Ldh-A 和Ldh-B在所分析的7种组织中均表达，Ldh-C只在肝和脑中表达 （图1).Ldh-A在骨骼肌中优势