【角膜缘干细胞移植】.ppt

* Vogt-栅栏（红星表示）是角膜缘干细胞生存的微环境，为血管组成的波形网状结构，是角膜上皮与角膜缘血管的过度结构。 潜在提供角膜缘细胞生长所需细胞因子。 A外眼像 B C蛋白酶消化后的角膜缘上皮细胞平片 D高倍镜下课件vogt是成波浪形的 E苏木精染色的角膜纵切片。证明角膜缘区是多细胞且富含血管的。 先天性无虹膜、慢性角膜缘炎或者化学烧伤， Stevens-Johnson 综合症等情况都可导致Vogt栅栏大片或完全缺失。 * 当各种因素破坏了角膜缘的干细胞或者维持角膜缘干细胞生存的微环境（Vogt栅拦），就可能发生角膜缘干细胞衰竭（limbal stem cell deficiency，LSCD） 。最主要的诊断标准是：角膜缘Vogt栅栏缺如 、角膜周边新生血管长入 和角膜结膜化且具荧光素通透性 。 * 病因各种因素破坏了角膜缘的干细胞或者维持角膜缘干细胞生存的微环境（Vogt栅拦），如。。。 LSCD可按两种方法分级： 1、局部与全部：局部缺乏：LESC在局部角膜缘缺失，但其他区域的数量较客观。这样导致局部（扇形面）SC缺乏区结膜新生血管长入角膜 全部SC缺乏将导致整个角膜失功和结构完全破坏。 2、切除下来的角膜缘组织中结膜细胞覆盖率：有报道称这样的分级对手术方法的选择及预后的判断有一定指导作用。 * 其中体外培养角膜缘干细胞可以最有效的减少供体角膜缘的损伤，并且可以只移植角膜上皮细胞，而不含Langerhans’ 细胞及血管，理论上可以降低潜在的排斥率。 * 较常用的是羊膜作为移植物载体。羊膜可以促进组织上皮化，减少炎症反应及损伤，保护角膜缘干细胞并为其生长提供支架与营养。先取大约1平方mm面积角膜缘正常组织，将其置于羊膜中央。体外培养约14-28天后可用于手术 * 离角膜缘5mm远去除过度增生结膜组织，人羊膜（HAM）组织携带的培养后的角膜缘干细胞置于基底膜表面，缝线固定与暴露的角膜区域，外部再覆盖一层羊膜。 * 1、主观症状如眼疼、畏光流泪、眼部不适以及相关的自觉症状可以采用问卷调查评判术前术后症状的改善程度 。 2、术后检查最佳矫正视力：单纯角膜上皮损害、角膜结膜化的患者，干细胞移植术后视力提高是可能的，但是多数患者角膜基质瘢痕形成，术后视力提高困难。 31% 67% 术后可提高两行或多于两行的视力。 3、眼表状况的改善：根据术前和术后临床表现、体征和印迹细胞学评分分级，主要包括重建稳定的眼表、角膜上皮的透明度、角膜结膜化是否消退、持续性角膜上皮缺损修复、角膜新生血管消退等。 4、采用印迹细胞学检测角膜上皮中是否存在杯状细胞是一个更客观的指标，常规印记细胞学检查苏木素－伊红或PAS染色可以鉴别是否有杯状细胞出现，间接证明角膜结膜化。由于LSCD患者病因不同，检测手段差异，术前不是100%均能检测出杯状细胞的存在，因此术后行印迹细胞学检测仅供参考。 这方面的主要缺点是不够客观，患者术前眼表病情差异大，导致术后眼表改善的程度差异。 * 眼表上皮细胞的特性： 1、杯状细胞存在于结膜上皮中。 2、检查细胞骨架蛋白的表达状况。 CK3和CK19可以用于区别角膜和结膜上皮细胞，即CK3只在角膜上细胞表达，而CK19只在结膜上皮细胞中表达，因此，CK3+/CK19?细胞是角膜上皮来源，CK3?/CK19+细胞是结膜来源细胞。（我看的文献是这个比率的高低，也不是绝对的）通过研究CK3/CK19有助于在没有发现杯状细胞的情况下识鉴别角膜结膜化，而采用印迹细胞学或角膜刮片免疫组织化学染色可以获得眼表细胞CK表型。 * P63在角膜缘上皮表达，在结膜不表达 * intergrin family： 整合素家族 Nestin:巢蛋白 * 1、通过患者外周血提取基因，与术后眼表印迹细胞学获得细胞的DNA基因表型比较，可以基本确定患者眼表是否存在供体细胞。 有报道显示原位杂交荧光标记（fluorescence in situ hybridization，FISH)和多聚酶链式反应限制性片段长度多态性分析（polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism，RFLP) 非常敏感，可以对较小标本鉴别出细胞的起源。 2、根据供受体性别差异，采用染色体分析确定供体细胞是否长期存在也是可以选择的方法之一。 * 。 说明此细胞是供体来源的。 。 * 根据患者的病情需要在角膜缘干细胞移植术后再次行穿透性角膜移植以恢复视力，就可以获得较完整地角膜组织，进行病理组织学检查，了解该组织上皮细胞特性等。但是本方法的局限性大，不利于术后的定期系统检查。而印迹细胞学获得的眼表上皮细胞更多地用于追踪供体细胞是否长期存在，该检查对患者的损伤轻微，容易取得患者