研究生蛋白质化学.ppt

蛋白质的分离、纯化和表征 原子力显微镜（AFM） Mirror adjustment screws Controller Laser Laser reflection window Adjustable detector mirror Removable cantilever holder Sample Primary lens Piezo tube scanner TrakScanTM tracking lens Laser aiming screws 1.紫外可见吸收 生物分子电子跃迁、分子结构。 需要的样品量少,易 光谱(UV-VIS) 进行动力学实验， 简便易做. 2.线二色性(LD) 亚基取向、分子外形、拓扑结 实验条件有一定要求, 构、分子柔性。 但不高. 3.荧光光谱 同1，还可得到特定位置的近邻、 样品纯度要求不高, 大分子柔性、分子的形状. 其余同1. 4.红外光谱 分子转动、振动能级间的跃迁 样品纯度要求较高,在测 (IR) (分子振动引起偶极矩的变化) 定如蛋白质等生物大分子 的一级结构和二级结构是 较理想的。 检测蛋白质构象的方法 序号 名称 可获得的信息、用途 特 点 5.喇曼光谱 分子振动能级间的跃迁,对组分基团的化 对固态、液态的 (Raman ) 学性质,原子和溶液中的生物分子间的相 结构均可测定, 对位置,相互作用均是敏感的(振动引起 样品少,要求不太 分子极化率的变化) 高,水干扰小。 6.园二色光谱 多肽、蛋白质二级构象、核酸构象及变化, 对样品要求不 (CD) 大分子对与其结合的配体空间的影响 太高,可以是 溶液、固体薄膜。 7.核磁共振 分子中特定位置的结构、键等。原子、 是研究生物聚合物中 (NMR) 分子的环境、近邻相互作用、分子的运 细致的分子构象强有 动以及它对磁偶极相互作用的影响。 力的手段, 具有观察 个别原子的能力。 8.电子顺磁共振 分子特定位置的结构。 要求样品特定原子含不成 (EPR) 对电子。 9.穆斯堡尔谱 分子中特定部位的结构。 仅几种核可利用,灵敏度高、 (MS) 特异性强。 检测蛋白质构象的方法 序号 名称 可获得的信息、用途 特 点 10.X-射线衍射 生物大分子的完整的三维结 分辨率高,样品要求是晶体。 (XRD) 构 、亚基的详细排列。