植物基因工程考试总结.docVIP

1、名词解释部分 GFP：绿色荧光蛋白,利用绿色荧光蛋白独特的发光机制，可将GFP作为蛋白质标签。 SiRNA：是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。 MAR或SAR：指被限制性内切酶消化后仍与核骨架结合的DNA序列，位于染色体的端粒附近，长度一般为30bp-1000bp，通常富含AT，两个MAR之间的染色质区域可形成大小为5kb-200kb的DNA环，构成独立的表达结构。MAR通过对染色质结构的直接限制而起作用，使转基因不能形成稳定的凝聚染色质结构，保证了转录的正常进行，使RNA酶聚合酶容易接近这种结构，从而提高了转基因的表达效率。 BIBAC：双元细菌人工染色体,使大片段外源DNA稳定整合到宿主细胞基因组中。 LHCP a/b or Cab：光诱导型启动子,在叶中具有叶绿体依赖的光诱导增强特性,在根中具有组织特异的沉默子功能. RNA interference (RNAi)：RNA干扰,与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象，使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达。 Dicer酶：是RNA酶Ⅲ家族的一个成员。Dicer酶参与RNAi反应，广泛存在于蠕虫，果蝇，真菌，植物及哺乳动物。 RdRP：RNA合成的聚合酶，在RdRP的作用下，进入细胞内的双链RNA通过类似于PCR的反应过程，呈指数级的数量扩增。 CAT：氯霉素乙酰转移酶基因，一种报告基因，是第1个用于检测细胞内转录活性的报告基因。 IPCR：反向PCR，它的目的在于扩增一段已知序列旁侧的DNA。反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色体序列，因此又可称为染色体缓移或染色体步移。 RDA： RT-PCR：逆转录PCR,是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。 GUS：β-葡萄糖苷酸酶基因,其反应产物可用多种方法检测出来。因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。 SSH：抑制性消减杂交，是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术，其原理是以抑制性多聚酶链反应(PCR)反应为基础的cDNA 消减杂交技术。 DDRT：传统mRNA差异显示技术，根据绝大多数真核细胞mRNA 3端具有的多聚腺苷酸尾（polyA）结构，因此可用含dT的寡聚核苷酸为引物将不同的mRNA反转录成cDNA。将差别表达条带中的DNA回收，扩增至所需含量，进行Southernblot或Northernblot或直接测序，从而对差异条带鉴定分析，以便最终获得差异表达的目的基因。 RAD：代表性差示分析，充分发挥了PCR以指数形式扩增双链模板，而以线性形式扩增单链模板的特性，通过消减和富集，使得目的基因片段得到特异性扩增。 RdRP：RNA为模板指导RNA合成的聚合酶,在RdRP 的作用下，进入细胞内的双链RNA通过类似于PCR的反应过程，呈指数级的数量扩增。 T-DNA标签：以T-DNA为标签，通过农杆菌转化植物，构建突变库，获得大量具表型的突变体，根据插入片段和插入点的基因组序列和突变性状进行分离检测。是一种高通量的分离和克隆植物功能基因的方法。 NPTⅡ：编码新霉素磷酸转移酶,能赋予细胞抗卡那霉素的能力，这是核基因转化中常用的一种筛选标记。 2、简答部分 1）筛选标记基因与报告基因的比较： 筛选标记基因（Selective Marker genes）：它的基因产物能给予植物细胞产生一种抗选择压力，在选择剂存在时，转化细胞生长、发育、分化基本不受影响，而没有转化的细胞不能正常生长。 报告基因（reporter genes）：是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，其表达产物非常容易被鉴定。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。它的基因产物能使植物细胞带上一种标记，起报告和识别作用。 报告基因，必须具备几个条件： (1)已被克隆和全序列已测定； (2)表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物； (3)其表达产物能进行定量测定。 2）一元载体和二元载体系统的比较： 双元载体（binary vecter）系统是指由两个分别含TDNA和Vir区的相容性突变Ti质粒构成的双质粒系统,又因为其T-DNA与Vir基因在两个独立的质粒上，通过反式激活T-DNA转移,故称之为反式载体（trans vecter）. 一元载体系统由两个质粒重组而成，分子量大，需要整合；二元载体不需要