黄土高原土壤微生物数量与酶活性的测定.docVIP

黄土高原土壤微生物数量与酶活性的测定 土壤是微生物栖息的最重要的生活环境之一，为微生物的生长提供了大量的营养元素和良好的碳源，氮源和能源。土壤微生物的数量和种类都十分丰富，主要种类有细菌，放线菌和真菌。土壤微生物作为地下食物网最初的分解者，是土壤有机质和土壤养分C,N,P,S等转化和循环的动力，并参与土壤中有机质的分解，腐殖质的形成，土壤养分的转化循环等。 土壤中也含有大量的酶类，土壤酶是一种生物催化剂，主要包括磷酸酶，蛋白酶，蔗糖酶，脲酶，过氧化氢酶，多酚氧化酶等，它能加速土壤中有机物质的化学反应。各种酶在土壤中的积累，是由于土壤微生物，土壤动物和植物根系的生命活动的结果。它们参与了许多重要的生物化学过程，腐殖质的合成和分解，有机化合物，高等植物和微生物残体的水解及其转化成为可利用的形态，以及氧化还原反应等，也就是说，它们参与了与土壤的发生和发育，以及与有效肥力的形成有关的诸过程的主要环节。 本实验的目的就是要测定土壤中三类微生物（细菌，放线菌，真菌）的数量，以及六种酶（磷酸酶，蛋白酶，蔗糖酶，脲酶，过氧化氢酶，多酚氧化酶）的活性。 目录 土壤微生物数量的测定 土壤细菌总数的测定 土壤真菌总数的测定 土壤放线菌总数的测定 土壤酶活性的测定 磷酸酶活性的测定 蛋白酶活性的测定 蔗糖酶活性的测定 脲酶活性的测定 过氧化氢酶活性的测定 过分氧化酶活性的测定 一窗体底端 （一）培养基的制备： Ⅰ测定微生物总量培养基细菌培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基） 牛肉膏 Beefextract 5.0g 蛋白胨 Peptone 10.0g NaCI 5.0g 蒸馏水 1000m1 PH 7.2-7.4 2.放线菌培养基（高氏 1 号琼脂培养基）可溶性淀20g KNO3 1g K2HPO4 0.5g MgSO4 . 7H2O 0.5g NaCl 0.05g FeSO4.7H2O 0.01g pH 7.2-7.4 注：配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状倒入少于所需水量的沸水中在火 上加热边搅拌边依次逐一溶化其他成分溶化补足水分到1000m调pH。 另倒平板之前在溶化的培养基中加重铬酸钾溶液300mL培养基加3%重铬1mL(l00ppm)。 3 .真菌培养基马丁（Martin）-孟加拉红琼脂培养基）葡萄糖 10.0g MgSO4 .7H2O O.5g 蛋白胨 5.0g 孟加拉红33.4mg （或者每升加 1%溶液 3.3mL） K2HPO4 1g 蒸馏水1000m1 PH 自然(45) 注：⑴灭菌前加卡那霉素20μg/ml或者倒平板之前加链霉素。⑵倒平板之前加乳酸，每100mL培养基加0.lmL。以上培养基皆加琼脂15g/L。Ⅱ测定功能菌所用培养基：亚硝酸细菌培养基（改良的斯蒂芬逊（Stephenson）培养基 A） 亚硝酸细菌培养基 (NH4)2SO4 2.0g NaH2PO4 0.25g MnSO4·4H2O 0.01g MgSO4·7H2O 0.03g K2HPO4 0.75g CaCO3 5.0g 蒸馏水 1000ml PH 7.2 注：CaCO3 最后加，不需要溶解，直接调PH，培养基中有这个成分是为了缓冲pH。因为硝化细菌的生长会产生酸化效应，使得氢离子过剩，到了一定程度硝化作用将无法继续，所以要碱性物质平衡酸碱。下同。 硝酸细菌培养基（改良的斯蒂芬逊（Stephenson）培养基 B） 硝酸细菌培养基 NaH2PO4 0.25g K2HPO4 0.75g MgSO4·7H2O 0.03g MnSO4·4H2O 0.01g CaCO3