人血浆载脂蛋白B100分离纯化方法的研究.pdf

第 2O卷第 3期 中 国 计 量 学 院 学 报 Vo1．2ONO．3 2009年 9月 JournalofChinaUniversityofMetrology Sep．2009 【文章编号】 1004—1540(2009)03—0283—04 人血浆载脂蛋 白BIO0分离纯化方法的研究 胡华军 ，张 明洲 ，刘 军，任娴婷 ，唐璐逸 ，金晓丹 (中国计量学院 生命科学学院，浙江 杭州 310018) 【摘 要】 通过硫酸右旋糖苷 (dextransulfate，Ds)法沉淀人血浆 中低密度脂蛋 白(LDL)及利用 SDS 电泳分离出其中载脂蛋 白B100(apoIip。pr0teinB100，ApoB100)，与弗 氏佐剂充分乳化后免疫新西兰大 白兔 ， 获得 ApoB100特异性多克隆抗体 ，经过 proteinA纯化后制备抗体亲和层析柱 ，并利用该亲和层析柱分离纯 化 SDS电泳 ApoB100条带的电洗脱液和人血浆 LDL中ApoB100．结果发现 ，所制备层析柱对 电洗脱 液 中ApoB100具有较好纯化效果． 【关键词】 人血浆载脂蛋 白；多克 隆抗体 ；免疫亲和层析 【中图分类号】 R155．5十1 【文 献标 识码】 A StudyonpurificationofhumanApoBlO0 HU Hua-jun，ZHANGMing-zhou，LIUJun，RENXian-ting，TANG Lu—yi，JIN Xiao-dan (CollegeofLifeSciences，ChinaJiliangUniversity，Hangzhou310018，China) Abstract：Low density lipoprotein (LDL) was run on SDSafterthe preparation ofLDL by the dextransulfate(DS)method，andApoB100wasrecoveredbyusingelectro—eluter．New Zealandwhiterabbits wereimmunizedwithApoB100．Theanti—serum showedspecialsensitivitytoApoB100andanti—ApoB100IgG wasisolatedfrom rabbitanti—serum byproteinA agarosebeads．UsingCNBR activatedsepharoseFFcombined withanti—ApoB100IgG astheimmunoaffinitychromatographiccolumn，theseparationofApoB100from SDS- PAGE orLDL isevidentlydifferent． Keywords：ApoB100；polyclonalantibody；immunoaffinitychromatography 载脂蛋 白(apolipoprotein，Apo)家族在体 内 B100、B48、B74、B26及少量 B50，在正常情况下 ， 脂类和胆固醇的运输 、代谢过程 中发挥重要作用． 以 ApoB100和 ApoB48较 为 重 要，ApoB48是 载脂蛋 白分为五大家族 ：ApoA、ApoB、ApoC、 ApoB100基 因不 同转录模式 的产物．ApoB100的 ApoE、Apo(a)．其 中载脂蛋 白B(ApoB)包括 相对分子质量约为 500kDa，主要分布于血浆极 【收稿 日期】 2009—06—09 【基金项 目】 浙江省 自然科学基金资助项 目(NO．Y3080390) 【作者简介】 胡华军(1974一)，男 ，安徽黄山人，讲师，主要研究方 向为分子生物学与免疫学 284 中 国 计 量 学 院 学 报