工业微生物液氮罐菌种的保藏方法.pdf

液氮罐 工业微生物菌种的保藏方法 通过南京液氮罐专家的介绍，我们得知，在日常生活中，很多事物和工作研 究都离不开冷处理，液氮罐也因此被广泛使用于各个行业之中。在此，专家向我 们介绍液氮罐是如何应用在工业生物学之中的。 菌种是一个国家的重要自然资源 , 菌种保藏工作是一项重要的微生物学基 础工作 , 菌种保藏工作者的任务是把从自然界分离得到的野生型或经人工 选 育得到的用于科学研究和工业生产等方面的优菌种 、 菌株 ,用各种适宜的方法 妥善保存 , 使之达到不死 、不衰 、不变异 、不污染 ,在长时间内保持原有的 生产性状和生命活力 ,以便于科学研究和生产使用 。 1 微生物菌种保藏的基本原理 人们在长时间的工作实践中 根据微生物的不 无论何种保藏方法 主要是, , 根据微生物生理 、 生化特同要求 ,在菌种保藏工作中不断摸索出各种方法 。 2保藏菌种用培养基 为了有效地保藏微生物菌种 , 首先需要有良好的培养基 。因此 , 研究选用 适宜的培养基是微生物 菌种保藏最基本的工作 。例如 ,ATCC( 美国的一个 微 生物菌种保藏机构) 在 1970 年以前采用的培养基 有 498 种 ,1974 年有 724 种 ,1978 年达到 1006 种 ,平 均每年增加 60 多种 。 3 微生物菌种的保藏方法 将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上 , 待菌 充分生长后 ,棉塞部分用油 纸包扎好 , 移至 4 ～ 6℃ 的冰箱中保藏 。 保藏时间依微生物的种类而有不 同 ,霉菌 、放线 菌及有芽孢的细菌保存 2～4 个月 ,移种一次 。酵母 菌两个 月 ,细菌最好每月移种一次 。斜面菌种应保 藏相继三代培养物以便对照 , 防止 因意外和污染造 成损失 。 此法的培养时间和培养温度影响其保藏质量 。 培 养时间过短 ,保存时容易死亡 , 培养时间长 , 生产 性能衰退 。一般以稍低于 生长最适温度培养至菌种 成熟进行保藏 ,效果较好 [6] 。 此法为实验室和工 厂菌种室常用的保藏法 , 优 点是操作简单 ,使用方便 , 不需特殊设备 , 能随 时检 查所保藏的菌株是否死亡 、 变异与污染杂菌等 。缺 点是容易变异 ,因 为培养基的物理 、 化学特性不是严 格恒定的 ,屡次传代会使微生物的代谢改 变 ,而影响 微生物的性状 ; 污染杂菌的机会亦较多 。 3. 2 液体石蜡保藏法 亦称矿物油保藏法 , 定期移植保藏法的辅助方 法。 (1) 液体石蜡的准备 选用优质化学纯液体石 蜡 将液体石蜡分装加塞: , , 用牛皮纸包好 , 采用以下 两种方式进行灭菌 : ①121℃湿热灭菌 30 min , 置 40℃ 恒温箱中蒸发水分 , 经无菌检查后备用 。 ②160℃ 干热灭菌 2h,冷却 后 经无菌检查后备用 。, (2) 斜面培养物的制备 将需要保藏的菌种 在 最: , 适宜的斜面培养基中培养 , 使得到健壮的菌体或 孢子 。 (3) 灌注石蜡 : 用灭 菌吸管吸取灭菌的液体石 蜡 ,注入已长好菌的斜面上 ,其用量以高出斜面顶端1 液氮罐 cm , (4) : , ( 4 6 为准 使菌种与空气隔绝 。 保藏 将试管直立 置低温 ～ ℃ 干燥 处 ) 或室温下保存 ( 有的微生物在室温下比冰箱中保存保藏 2 年以上不死 , 酵母菌可保藏 1 ～ 2 年 , 一般无 芽孢细菌也可保藏 1 年左右 , 甚至用一般 , 37 , 3 方法很难 保藏的脑膜炎球菌 在 ℃ 温箱内 亦可保藏 个 月之久 。此 法的优点是制作简单 ,不需特殊设备 ,且 不需经常移种 。缺点是保存时必须直 立放置 , 所占 位置较大 ,同时也不便携带 。从液体石蜡下面取培 养物移种 后 接种环在火焰上烧灼时 培养物容易与 残留的液体石蜡一起飞溅 应特别, , , 注意 。 3.滤纸保藏法 (1) 将滤纸剪成 0.5 cm ×2cm 的小条 , 装入 1.0.6 cm ×cm 的安瓿管中 ,每管 1～