嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化研究.pdf

※生物工程 食品科学 2007, Vol. 28, No. 12 305 嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化研究 1,2 1 1 2,* 王 武 ，付 敏 ，唐晓明 ，潘 见 (1.合肥工业大学生物与食品工程学院，安徽 合肥 ；230009 2.农产品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥 230009) 摘 要：本实验对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化进行了研究。嗜酸乳杆菌的粗酶液经40%～80%饱和度的 硫酸铵盐析、透析、Sephadex G-100凝胶过滤层析等步骤进行分离纯化后，酶的纯化倍数达到3.10，比活力为 475.75U/(mg蛋白质)；纯化后的亚油酸异构酶在SDS电泳中只呈现一条带，并测得分子量约为46.6kDa。 关键词：嗜酸乳杆菌；亚油酸异构酶；分离纯化；SDS电泳 Study on Purification of Lionleic Ismerase fromLactobacillus acidophilus 1,2 1 1 2, WANG Wu，FU Min，TANG Xiao-ming，PAN Jian* a； Abstract：The purification of Lionleic ismerase inLactobacillus acidophilus Lactobacillus acidophilus was purified by ammonium sulfate solution of 40%～ Key words：Lactobacillus acidophilus；lionleic ismerase；purification；SDS 中图分类号：Q558 文献标识码：A 文章编号： 共轭亚油酸(简称CLA)是一系列在C9，11或C10， 1 材料与方法 12位具有双键的亚油酸(linoleic acid简称LA)的位置和几 [1] [2-3] 1.1材料与设备 何异构体的总称 。研究发现，CLA具有抑制肿瘤 、 [4] 抗动脉粥样硬化 、抗氧化等生理功能，在食品医药领 1.1.1菌种及试剂 域具有诱人的应用前景。目前获取CLA的方法主要有化 嗜酸乳杆菌( l.1854)中科 [5] 学合成法和生物合成法 ，化学合成法产率较高，但产 院生物所。 物往往是多种异构体的混合物，且含环化副产物，难 共轭亚油酸(99%)、亚油酸(60%) 公司；Sigma 以分离，制约了其在食品医药领域的应用；生物合成法 K2HPO4、MgSO4 ·7H2O、MnSO4 ·H2O、柠檬酸二 则是利用亚油酸异构酶将LA转化为高活性的c9，t11- 铵、NaAc、葡萄糖、乳糖、NaCl、正己烷、考马 18:2和(或)t10，c12- 18:2 CLA，应用前景广阔。 斯亮蓝G-250、考马斯亮蓝R-250、聚乙二醇、Sephadex 亚油酸异构酶(Lionleic ismerase)是微生物细胞在培养 液中存在LA诱导的前提下，于菌体内生成的一种胞内 氢二钠、十二烷基硫酸钠、巯基乙醇、丙烯酰胺、 [6] N,N-亚甲基双丙稀酰胺、四甲基乙二胺、过硫酸铵、 酶 ，它只作用于具有cis9，cisl2-18:2二烯结构且羧基 游