化脓及创伤感染标本细菌学检验的的相关知识.doc

化脓及创伤感染标本细菌学检验的的相关知识 　 一、脓液及创伤感染标本中可能发现的细菌 在临床化脓及创伤感染标本的细菌学检验中可能发现的细菌： 1．革兰阳性球菌 葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、四联球菌。 2．革兰阴性球菌 卡他布兰汉菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、干燥球菌、黄色球菌。 3．革兰阳性杆菌 破伤风芽胞梭菌、炭疽芽胞杆菌、产气荚膜芽胞梭菌、白喉棒状杆菌、类白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌。 4．革兰阴性杆菌 大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、产气肠杆菌、鼠疫耶尔森菌、土拉热弗朗西斯菌、肺炎克雷伯菌、厌氧杆菌。 5．其他 伊色列放线菌、星形奴卡菌、白色假丝酵母菌。 二、标本的采集 （一） 操作 1．首先用无菌生理盐水拭净病灶表面的污染杂菌。 2．对已破溃脓肿一般以无菌棉拭子采取脓液及病灶深部的分泌物， 而瘘管则以无菌方法采取组织碎片，放入无菌试管中送检。 3．对未破溃脓肿最好用2．5 ％～3 ％碘酊和75 ％ 酒精消毒患部皮肤后，以无菌注射器抽取脓汁及分泌物，也可于切开排脓时，以无菌棉拭采取。 4．有时也可将沾有脓汁的最内层敷料放入无菌平皿内送检。 5．对放线菌的标本， 常用无菌棉拭挤压瘘管，选取流出脓汁中的“硫磺样颗粒”盛于试管内送检，也可将灭菌纱布塞入瘘管内。次日取出送检。 （二） 注意事项 1．如果患者局部伤口已用抗生素磺胺类药物治疗，则应在培养基内加入相应的物质（如青霉素酶、对氨基苯甲酸等） 以避免假阴性结果的出现。 2．当创伤出血时或敷有药物在2 小时以内及烧伤在12 小时内均不应采集标本，此时获得阳性结果的机会甚少。 3．标本采取后应及时检查，如不能立即检验应置冰箱内保存，以防杂菌污染。 4．采集标本时注意观察脓汁及分泌物的性状， 色泽及有无恶臭味等，为培养和鉴定提供参考依据。如脓汁带绿色时，可能有铜绿假单胞菌的感染，有恶臭味时可能有厌氧菌感染。 三、检验程序 脓液及创伤感染标本的细菌学检验程序参见图 化脓及创伤感染标本的检验程序 四、检验方法及报告方式 （一） 直接涂片检查 1．一般细菌涂片检查 取一洁净玻片，用玻璃笔标明标本号、将待检标本置于玻片上涂成薄膜，经火焰固定后进行革兰染色镜检。根据镜下所见细菌的形态及染色特点，可做初步报告：“找到革兰X 性X 菌，形似X X 菌”。如发现具有芽胞或荚膜的细菌，报告时应注明其大小与位置及疑似X X 菌。如镜检时未发现细菌时，可初步报告为： “直接涂片， 未找到细菌”。对疑有结核分枝杆菌感染的标本，还应作抗酸染色检查。 2．伊色列放线菌及星形奴卡菌涂片检查 用肉眼或放大镜检查脓汁、分泌物或敷料内有无直径1 m m 以下的灰白色或硫磺样颗粒，用接种环挑取含有硫磺样颗粒的标本置于洁净的玻片内， 覆以盖玻片， 轻轻挤压。若颗粒结构不明显，可加50g ～100g／L 的氢氧化钾溶液2 ～3 滴加以消化。用低倍镜及高倍镜仔细观察。如有伊色列放线菌的颗粒，可见中央为交织的菌丝，菌丝的末端稍膨大似棒状排列并呈放射状。有时可见嵌于类似明胶的鞘膜内。奴卡菌与伊色列放线菌形态基本上相同，但在分枝菌丝末端一般不膨大成棒状，革兰染色阳性，抗酸染色呈抗酸性；而伊色列放线菌革兰染色阳性，抗酸染色呈蓝色，为非抗酸性。如查见中间部分菌丝染成革兰阳性，向四周放射的末梢部分菌丝呈革兰阴性，抗酸染色为非抗酸性者，可报告：“找到伊色列放线菌”；若革兰染色反应与伊色列放线菌相同，而抗酸染色为抗酸性者，可报告为：“找到奴卡菌。” 如革兰染色为阴性，抗酸染色为非抗酸性者，可报告：“未找到伊色列放线菌及星形奴卡菌”。 （二） 培养检查 1．一般细菌培养 取脓汁棉拭子或将脓汁用接种环接种于血平板上划线分离，置37 ℃ 孵箱培养18 ～24h ，观察结果，如有细菌生长，可按菌落特征挑取各种单独的菌落，分别涂片进行革兰染色镜检。通常根据菌落特点结合涂片结果，多可初步判断出细菌的类属，然后再按各类细菌的生物学性状进行鉴定。菌落小如针尖，周围伴有大而透明的溶血环可能为溶血性链球菌，结合镜检有助于鉴别，必要时进行血清肉汤培养，若出现沉淀生长且涂片染色为长链状排列，即可报告：“培养出乙型溶血性链球菌。” 血平板上见中等大小有脂溶性金黄色色素或无特殊色素有透明溶血环，涂片染色为革兰阳性球菌呈葡萄状排列，可进一步作甘露醇发酵试验，血浆凝固酶试验等， 如阳性时，可报告：“培养出金黄色葡萄球菌”。如见到菌落与上述近似但无溶血环，血浆凝固酶试验阴性，可初步报告：“培养出血浆凝固酶阴性葡萄球菌”。如见菌落小，周围有草绿色溶血环，染色镜检为革兰阳性球菌，呈短链排列多为甲型溶血性链球菌，呈双排列多为肺炎链球菌。确定诊断则需进一步作鉴定试验和鉴别试验。如有变形杆菌生长而影响其他细菌分离，可将标本接种于含有4g／L 硼酸的血平板上，以抑制变形杆菌生长，