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如何选择HPLC溶剂 斯百全化学（上海）有限公司 400-856-0488 +86-21 高效液相色谱法（HPLC） 20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术 目前已成为生物化学、医学研究、药物临床、化学化工、食品卫生、环保检测等领域最常用的化学分离分析手段 1、定性分析 2、定量分析（用于化合物含量及纯度分析） 简单来讲，使用HPLC分析的主要目的在于分离一个混合物中各个组分，并定量出各组分在混合物中所占的比重。 工作过程： 通过高压泵， 连续的将流动相按照一定流速流过柱子；通过进样器，注入样品混合物。由于混合物中各组分性质不同，因而它们在柱內移动速度不同而逐渐分离。通过检测器检测，得到组分的电信号并进行放大；记录仪将放大的电信号以图形形式记录下来，由此得到液相色谱图。 高效液相色谱法（HPLC） 分离原理： 溶于流动相（mobile phase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationary phase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滯留时间不同，从而先后从固定相中流出 在色谱分析中，如何选择最佳的 色谱条件以实现最理想分离， 是色谱工作者的重要工作， 也是用计算机实现HPLC 分析方法建立和优化的任务之一 高效液相色谱法（HPLC） HPLC分离指标 分离度：无论是定性鉴别还是定量分析，均要求待测峰与其它峰、內标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。不一定是两种待测物的分离度，而有可能是它们与其最接近的干扰物的分离度。应当尽量保证1.5，2.0比较理想，再大也可以，但沒太大意义。 峰型：窄而对称的峰最为赏心悦目，这也是保证良好分离度的因素，同时有利于定量的准确和良好的重现。（拖尾引子：通过计算5%峰高处峰宽与峰顶点至前沿的距离比来评价峰形的参数。） 塔板数：和半峰宽相关。半峰宽越小，塔板数越大，峰就越窄，分离越好。究竟要多大，应以良好的分离为准。 保留时间：要求的是重现性，是色谱定性的依据，同时也決定了分析时间 RSD(标准偏差）2 正确选择流动相直接影响检测结果和仪器的损耗！ 高效液相色谱法（HPLC） 液相色谱系统的很多问题都能在谱图上反映出來，其中一些问题可以通过改变 设备参数得到解決，而其它的问题必须通过修改操作程序来解決。 谱图问题 与流动相或溶剂有关的原因 解决办法 峰拖尾 流动相pH选择错误 调整pH值。(对于碱性化合物，低pH值更有利于得到对称峰) 峰前延 样品溶剂选择不恰当 使用合适的溶剂 峰分叉 样品溶剂不溶于流动相 改变样品溶剂 鬼峰 流动相问题 a.检查流动相是否纯净b.使用流动相作为样品溶剂c.减少进样体积 保留时间波动/不断变化 流动相组分变化选择不恰当 防止变化（蒸发、反应等）/a.更换合适的流动相b.选择合适的混合流动相 基线漂移 流动相污染、变质或由 低品质溶剂配成/不均匀/配比不当或流速变化 检查流动相的组成,使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂/使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂,流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气/更改配比或流速,定期检查流动相组成及流速 基线噪音（规则的） 流动相混合不完全 用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂 基线噪音（不规则的） 流动相污染、变质或由低质溶剂配成/流动相各溶剂不相溶 检查流动相的组成/选择互溶的流动相 宽峰 流动相组成变化 重新制备新的流动相 分离度降低 流动相污染或变质（引起保留时间变化） 重新配置流动相 对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键！ HPLC溶剂的要求 （1）高纯度，溶剂与固定相不互溶，并能保持色谱柱的稳定性 由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度要求也高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”）。 （2）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性，即足够的溶解能力 溶剂的极性要与待测样品相匹配，如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响纯化分离，且会使柱子恶化。 (3）溶剂要与检测器匹配 对于UV-Vis，所用流动相在检测波长下应沒有吸收或吸收很小 （4）化学稳定性好 不能选与样品发生反应或聚合的溶剂 (5）低粘度，沸点适中 减小溶质的传质阻力，降低柱压，利于提高柱效。 常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙腈等；粘度过低的溶剂也不宜采用，如戊烷、乙醚等，易在色谱柱或检测器內形成气泡，影响分离 HPLC溶剂的要求 HPLC溶剂关键性能 UV吸收性 HPLC级试剂是用