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实时荧光定量PCR仪ViiA 7 操作步骤 ——以RNase P示例实验为例 一、定义384孔样品模块的实验属性 打开电脑访问ViiA 7 软件，然后打开左侧仪器开关。单击Experiment Setup图标。单击Experiment Properties以访问Experiment Properties屏幕。 在ViiA 7 软件中设计RNase P实验示例时，请输入： 二、使用Define屏幕定义RNase P示例实验的目标基因、样品。 1. 单击Define以访问Define屏幕。 2. 定义目标基因 a. 单击New以增加和定义目标基因。 b. 在目标基因表中，单击Target Name列中的一个单元格，并输入： c. （可选）单击Save以便将新增或原有的正在编辑的目标基因保存到Target Library。 d. 单击Add Saved从目标基因库添加目标基因。 3. 定义样品 a. 单击New以增加和命名样品。 b. 在样品表中，单击Sample Name列中的一个单元格，并输入： c. （可选）单击Save以将新增或原有的正在编辑的样品保存到Sample Library。 d. 单击Add Saved从样品库添加样品。 4. （可选）定义生物学平行测定 a. 在Define Biological Replicates Groups表中，单击New以增加和命名生物学平行测定组。 b. 从下拉菜单选择Color。 c. 单击Comments列，以便为该生物学平行测定组添加注释。 注：实验示例不使用生物学平行测定组。保留Biological Replicate Groups空白。 5. 选择用作参比荧光的染料ROX。 三、分配目标基因、样品和生物学组 利用Assign（分配）屏幕将目标基因、样品和生物学平行测定组分配到RNase P实验示例反应板内的各孔。 注：您可以在不进行分配的情况下开始运行，但在扩增曲线中，将不会有实时数据（只有在您已经对板进行设置后，才可以见到扩增曲线）。 1. 单击Assign以访问Assign屏幕。 2. 定义并设置标准品。 a. 单击Assign屏幕上的Define and Set Up Standards（定义和设置标准品）。 b. 选择目标基因。 c. 定义标准曲线。 d. 为标准品选择和安排反应孔。 3. 目标基因和样品。 a. 利用Assign屏幕上的板布局或反应孔表选择反应孔。 b. 利用下拉菜单分配目标基因RNase P为其任务。 c. 选择您想要分配给所选反应孔的样品附近的复选框。 四、设置运行方法 利用Run Method屏幕为RNase P实验设置运行方法。 1. 单击Run Method以访问Run Method屏幕。 2. 为每个孔的反应体积输入1到20的数字。对于下列消耗品，ViiA? 7仪器支持的最大反应体积如下： ① MicroAmp? Optical 384孔反应板 – 20μL ② 微流体卡 – 1μL 3. 在Graphical View选项卡中： ① 确保热循环扩增曲线适合您的试剂。 ② 如需要，可对默认的运行方法进行编辑，或用ViiA? 7 Dx软件随附的运行方法库中的一个运行方法代替默认运行方法。 ③ 通过单击启用数据采集。 注： 当需要对各阶段实时采集的数据进行分析时，启用数据采集特别有用。 ④ 编辑升降温速度。您可以增加或降低某一阶段的升降温速度。 ⑤ 编辑PCR阶段 a. 更改PCR阶段的循环次数。 b. 选择Enable AutoDelta复选框以增加或降低后续各循环的温度和（或）保温时间。您还可以更改AutoDelta的起始循环。启用AutoDelta后会显示图标。单击AutoDelta Off图标以改变AutoDelta Settings对话框中循环阶段的AutoDelta设置。然后，单击Save Setting以显示AutoDelta On 图标。 五、开始实验 1. 触碰ViiA? 7 Dx Instrument仪器触屏上的 按钮， 或单击ViiA 7软件Instrument Console屏幕的Open Door，以从仪器侧面弹出板适配器。 2. 将反应板或微流体卡放到板适配器上。确保反应板或微流体卡正确对齐。 ① 确保孔A1位于反应板或微流体卡托盘左上方的位置。 ② 确保反应板或微流体卡的条形码朝向仪器的前面。 3. 触碰ViiA? 7 Dx Instrument仪器触屏上的 按钮， 或单击ViiA? 7软件Instrument