尿液蛋白糖和酮体检测长沙医学院.ppt

尿液蛋白质、葡萄糖与酮体检测 长沙医学院临检教研室 陈丽华 目的要求 掌握：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体Rothera改良法。 熟悉：尿蛋白形成机制与分类、尿蛋白测定的质量控制。 了解：尿酮体的产生。 重点：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体Rothera改良法。 难点：质量控制 肾小球滤过膜示意图 脂肪酸 乙酰辅酶A 一、概述 1.历史：1673年，弗雷德里克.德克斯(Frederick Dekkers)用加热醋酸酸化尿液方法测定尿液中的蛋白。 1790年，弗兰西斯.贺母（Fancis Home）用硝酸法检测水肿患者尿液中的蛋白。 1827年，理查德.伯瑞特（Richard Bright）用加热的方法检测肾病患者尿液中的蛋白 2.正常尿蛋白的含量和组成：尿蛋白总量为30~130 mg/24h，一次随机尿为0~80mg/L。 蛋白定性试验：阴性。 主要成分是相对分子质量小的蛋白如β2微球蛋白、α2微球蛋白、溶菌酶等。 3.蛋白尿：尿蛋白总量超过150mg/24h或100mg/L，蛋白定性试验：阳性。 二、病理性蛋白尿分类及原因 1、肾小球性蛋白尿：最常见 （1）选择性蛋白尿：当肾小球损伤较轻时, 以4－9万的相对分子质量中等的清蛋白为主，可伴抗凝血酶、转铁蛋白、糖蛋白及少量小相对分子质量的β2－M、Fc片断等。 Pro:+++-++++. Pro大于3.5g/24h. 最典型的是肾病综合症。 （2）非选择性蛋白尿 反映肾小球毛细血管壁有严重破裂损伤。以分子量较大和中等的蛋白质同时存在为主，Pro：＋－＋＋＋＋。定量0.5~3g/L。多见于原发或继发肾小球疾病。 3、混合性蛋白尿：肾小管和肾小球同时损伤，大中小Pro均增多。 4、溢出性蛋白尿：指血液循环中，出现了以中、小相对分子质量为主的异常蛋白质，如：游离Hb、肌红蛋白、溶菌酶、本周蛋白等增多，经肾小球滤出，超过了肾小管的重吸收最大能力，而大量出现在尿中。Pro：＋—＋＋。常见于MM。 5、组织性蛋白尿：肾组织代谢产生、组织破坏分解的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质等。Pro：±－＋；多为T－H糖蛋白 三、生理性蛋白尿 1.功能性蛋白尿：剧烈运动、发热、寒冷刺激、精神紧张、交感神经兴奋等，多见与青少年。 2.体位性蛋白尿：又称直立性蛋白尿，特点：卧位时尿蛋白阴性，起床活动或久立后，尿蛋白阳性，平卧后又阴性。多见于发育期少年。 3.偶然性蛋白尿：又称假性蛋白尿，混入多量血液、脓液、粘液或生殖系统分泌物，如：白带、月经血、精液、前列腺液等。 四、蛋白质定性检测方法 （一）加热乙酸法 1.原理：①加热煮沸使蛋白变性、凝固， ②然后加酸使尿液pH接近尿蛋白质等电点，在含有适量无机盐状况下，蛋白质更易于变性沉淀。 ③加酸还可溶解因加热析出的磷酸盐或碳酸盐结晶所致的混浊。 2、材料：酒精灯、试管、试管夹、滴管 3、试剂：５％醋酸 （一）加热乙酸法 4.操作：（1）取大试管1支，用试管夹夹住管底部，加尿液至试管2/3处。 （2）斜持试管下端，在酒精灯上加热下1/3处，煮沸即止。 （3）加5%乙酸2~3滴，再煮沸后立即观察结果。 （4）结果判断如下： ???? 实验结果 结果判断 相当含量（g/L） 清晰透明无 - 0 改变 黑色背景下， ± 　 0.1~0.15 极轻度混浊 明显白色雾状， + 0.2~0.5 但无颗粒 明显混浊， ++ 0.6~2.0 出现颗粒 大量絮状沉淀 +++ 2.0~5.0 但无凝块 严重混浊， ++++ ＞5.0 有大凝块 5.注意事项 （1）操作程序要对：加热 加酸 再加热。 （2）加入醋酸量要适当，pH9或pH3可以产生假阴性。 （3）加热时使底部受热，上部好作对照。 （4）加热时管口勿对别人。 （二）磺基水杨酸法 1.原理：在酸性条件下，磺基水杨酸的阴离子和蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性蛋白盐沉淀。 2.操作： 3.注意事项 ①本试验方法灵敏度高，极微浑浊无意义。 ②判断结果需及时。 ③尿酸盐和尿酸过多，可出现假阳性。 ④尿内含碘造影剂、大剂量青霉素等可使反应呈假阳性。 五、蛋白质定性检查参考值：阴性 1、加热醋酸法： （1）特异性强，干扰因素少，能同时检出A、G，但敏感