非血缘干细胞动员、采集与检测中的问题和对策.pptVIP

非血缘干细胞动员、采集与检测中的问题和对策 北京市道培医院 童春容 管理目标 安全性：确保供者无长期或不可逆转的 不良反应 有效性：CD34+细胞数是最根本的要求 安全性 有效性 内容介绍 血液细胞、G-CSF动员后血液细胞、机采PBSC中细胞分类特征 G-CSF注射期间的注意事项 PBSC采集中的注意事项 有核细胞及CD34+计数方法及注意事项 正常血液细胞成份 白细胞：为有核细胞(NC)的主要成份 粒细胞： 嗜中性粒细胞(N)：50-70% 嗜酸性粒细胞(Eo)：0.5-5% 嗜碱性粒细胞(Ba)：1% 淋巴细胞: 20-40% 单核细胞: 3-8% 红细胞 血小板 单个核细胞(MNC) G-CSF动员后血液细胞成份 白细胞明显增加（20-80×109/L)，以N增加为主 粒细胞： 嗜中性粒细胞(N)：80% 嗜酸性粒细胞(Eo)：0.5-5% 嗜碱性粒细胞(Ba)：1% 淋巴细胞: 10% 单核细胞: 10% 偶有有核红细胞 红细胞: 变化不大 血小板：不变或有所减少 单个核细胞(MNC) 机采G-CSF动员后血液细胞成份（PBSC采集物） 因为CD34+HSC主要在单个细胞中，因此机采PBSC主要为MNC CD34+细胞占全部有核细胞(ANC)0.3-1.5% 粒细胞： 嗜中性粒细胞(N)：10% 嗜酸性粒细胞(Eo)：2% 嗜碱性粒细胞(Ba)：1% 淋巴细胞: 30-50% 单核细胞: 30-50% 偶有有核红细胞或其它中晚幼粒细胞 单个核细胞(MNC) NC、MNC、CD34+细胞检测的注意事项(详见规程） 对每个有关的细节都要有严格的SOP及质控管理，如 抽样：检测样本与采集袋中的样本要充分混匀 检测：上机前要充分混匀 对检测的仪器设备及其清洁卫生、保养、校准等 试剂的选择、保存； 标本的保存 检测过程、结果分析 结果的审核与报告 PBSC采集物检测流程 抽样、标记、运送 有核细胞计数 染色 溶解红细胞 ±洗涤 ±固定贮存 数据分析、计算、最终报告 血液细胞计数室 FCM实验室 白细胞分类 FCM检测 细胞形态室 报告给主管医师 PBSC采集物的检测 最终目的是要计算出患者每公斤体重要接受多少CD34+细胞及有核细胞，需要以下几方面的检测才能达到此目标 采集完成后，血液细胞分离机自动显示采集物容量（ml) 对采集物抽样用血液细胞计数仪检测采集物中有核细胞的浓度，一般为200×109个细胞/1000ml左右（80-300） 对采集物抽样用流式细胞仪检测CD34+细胞占有核细胞的比例 对采集物抽样涂片目测白细胞（有核细胞）分类 PBSC采集物的计算 举例，一患者为50kg体重，他的供者第一次采集了PBSC 160ml，采集物有核细胞浓度为200×109个细胞/1000ml，CD34+细胞占全部有核细胞的0.78%，请问此次采集是否达到卫生部制定的采集标准？ 采集物中有核细胞总数为： 200×109个细胞/1000ml ×160ml =3.2×1010 患者每公斤体重接受的有核细胞数=3.2×1010/50=6.4X108/kg 采集物中CD34+细胞总数=3.2×1010×0.78%=2.496×108 患者每公斤体重接受的CD34+细胞数=2.496×108/50 =4.99X106/kg 此次采集物的NC及CD34+细胞数高于卫生部的标准 可能引起检测结果误差的状况 样本： 抽样 标记 保存温度 检测时间 操作人员： 技术差异 处理认识问题的能力 是否执行SOP 仪器设备： 每天状况不同 不同仪器 不同实验室 试剂： 不同批号 荧光的漂白 污染 保存不当 PBSC采集物检测中的注意事项 抽样: 抽样前要将采集袋中的PBSC采集物与小辫中的采集物混合5次以上; 检测:采集完成后立即送检 采集物的有核细胞浓度计数 采用全自动分析仪来检测有核细胞计数 4. 在振荡器上充分混匀后抽样 5. 用配套的细胞稀释液将采集物分别稀释2倍、10倍 6. 再次在振荡器上充分混匀后上机检测 7. 将2、10倍稀释后的计数浓度均值作最终报告值 G-CSF注射中不良反应发生的机制 骨髓造血细胞迅速增加：多部位疼痛、胸闷 异体蛋白反应：流感样症状、过敏等 血白细胞升高引起的血管堵塞、血小板聚集 功能增加高凝状态：血栓、