牡丹组培实验设计规划.docVIP

牡丹组培苗叶片中主要化学物质含量的变化实验流程计划书 一、实验目的： 牡丹(Paeonia suffruticosa)属芍药科芍药属宿根木本花卉，花朵雍容华贵，端庄富丽，居中国传统名花之首，素有“花中之王”、“国色天香”之美誉。中国人民还把牡丹作为幸福、美好、繁荣昌盛的象征，深受人们喜爱。牡丹不仅有极高的观赏价值，还有相当重要的药用价值。牡丹传统的繁殖方式有种子繁殖、分株繁殖、压条繁殖和嫁接繁殖等。但在实际生产中存在一些问题，如种子具有休眠习性，有些品种在自然状态下萌发需要8 个月的时间且生根萌发率极低，一些名贵品种经长期人工栽培，结实能力降低，种子发育不良。嫁接和分株等常规无性繁殖方式不仅成苗周期长，出苗量少，质量参差不齐，且只能在生长季节繁殖，繁殖速度有限，难以满足生产的需求。采用组织培养法繁殖牡丹，是提高牡丹繁殖率的有效途径。国内、外学者对牡丹离体培养进行了研究，但至今未能用于生产实践，原因是牡丹组培快繁难度较大，主要表现在（1）褐化严重，牡丹组培苗褐化严重，影响外植体与继代植株的正常生长与分化增殖及生根；（2）生根率不高，甚至一些品种尚未获得生根苗；（3）生根质量不高,不定根从茎基部的愈伤组织产生，使根与茎中间形成离层，影响下一步的移栽工作，牡丹生根苗移栽后的成活率极低，限制了组培技术在实际工作中的应用。本实验以探寻在基本培养基下培养基配比及不同培养温度对牡丹组培苗生长及牡丹组培苗叶片中主要化学物质含量的变化的影响为目的，以期为牡丹的大量快速生产提供一定的实践经验。 实验具体流程 1、供试材料：对采集来的牡丹外植体（在借鉴其他相关实验的基础上，我们采用洛阳红牡丹土苗和茎上幼苗）进行消毒。消毒采用自来水连续冲洗5～10min，在超净工作台上用0.1％升汞消毒10min，无菌水冲洗5 次。然后将处理后的外植体接种于培养基（MS+BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+ 白糖30.0g/L+ 琼脂6.0g/L）上培养，待长成有一定数量的无菌繁殖系后进行试验。 2、实验设计及方法 2.1、不同激素配比对洛阳红牡丹继代增殖的影响 基本培养基MS分别附加30g/L 白糖、6g/L 琼脂及不同浓度的BA、NAA 组合，接种洛阳红牡丹继代幼苗，完全随机化设计，每种处理接种十瓶，每瓶接种5-6株，要求苗的大小相近。具体处理见下表（表1） 2.2、不同培养温度对洛阳红牡丹继代增值的影响 洛阳红牡丹苗接种后分别放置在温度为 20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃恒温培养箱和25±3℃培养室中进行培养，观察其生长分化情况，并作出相关记录。 2.3、生长调节剂对洛阳红牡丹幼苗生根的影响 取上述培养好的牡丹有效幼苗（生长健壮，株高1.5厘米左右）放于添加不同浓度的NAA和IAA（MS+ 白糖30.0g/L+ 琼脂6.0g/L）的培养基上，进行牡丹幼苗不定根诱导。完全随机化处理设计，每处理接种十瓶，每瓶接种4-6株。具体处理见表2 2.4、不同配比和条件下幼苗主要化学物质含量变化的分析 对各阶段的幼苗叶片进行主要化学物质含量测定。测定的主要化学物质包括单位鲜重蛋白质含量，单位鲜重可溶性还原糖含量，单位鲜重DNA含量。测定时期为培养前，培养长成牡丹继代苗时，培养生成根系后。 2.41、单位鲜重蛋白质含量测定方法：用Folin-酚试剂法对蛋白质含量进行测定，或利用蛋白质的物理特性，用紫外吸收法对蛋白质含量进行测定。 2.42、单位鲜重可溶性还原糖含量变化分析 2.43、单位鲜重DNA含量变化分析 2.5、培养条件 除温度外，其他培养条件为14h/d 光照，光照强度2000lux。 2.6、结果与调查分析 利用生物统计学的分析方法，用DPS或office软件对实验结果进行分析。分析前需统计的量包括2.1中各种激素配比下分化苗和有效苗的数量、分析得出的最佳配比和培养温度下幼苗叶片的主要化学物质含量，2.2中个激素配比下苗的生根数、分析得出的最佳配比中幼苗叶片的主要化学物质含量，栽培的牡丹幼苗以上各化学物质单位含量。 讨论 讨论在什么样的情况下，如什么激素配比，温度对牡丹产生继代幼苗更加有利；什么激素配比条件下对牡丹幼苗生根更加有利、和栽培牡丹相比，组培幼苗化学物质含量的比较等。 得出结论 表一 ：不同激素配比对洛阳红牡丹继代增殖的影响 分化苗数 BA NAA 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 表二：生长调节剂对洛阳红牡丹幼苗生根的影响 NAA浓度 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 生根率 老师，这个是我借鉴了别