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固相载体基础知识培训 --------Written by Stahn Cheung 将固相合成与其它技术分开来的唯一特征是固相载体。固相载体必须具备以下条件: 1. 它必须包含反应位点，以使肽链能连在这些位点上，并在以后除去； 2. 它还必须对合成过程中的物理和化学条件稳定； 3. 载体必须允许不断增长的肽链和试剂之间快速的、不受阻碍的接触； 4. 载体必须允许提供足够的连接点以使每单位体积的载体给出有用产量的肽，并且必须尽量减少被（载体）束缚的肽链之间的相互作用。 1、 聚苯乙烯-苯二乙烯交联树脂。 聚苯乙烯-苯二乙烯交联树脂是多肽合成中最早、最常用的固相载体，其结构如图 它由小珠体构成，直径20-150μm。为了使载体具有较大的网格空间足以容纳不断增长的较长肽链而且便于反应物进入载体内部，一般均采用1-2％交联度的PS树脂。但交联度过低，则溶胀性过大，不易过滤，而且机械性能不好，易于破碎。 2．聚酰胺一般指聚丙烯酰胺凝胶。目前应用不广泛，这里不作细述。 3．聚乙烯-乙二醇类树脂 a .聚乙烯-乙二醇-聚苯乙烯（PEG-PS） 它由不溶的PS母体构成，聚乙烯-乙二醇（PEG）链附着在上面。提高固相载体中肽链的溶剂化。研究过各种链长的PEG，但应用最成功是分子量在2000-3000Da之间的。有较好的物理化学特性，如溶胀性，物理稳定性，在流动系统中抗磨和抗机械压力能力等 b.PEGA树脂及PEG类树脂 它们的性质和PEG-PS树脂有很多相似之处 反应基团的导入 以PS树脂为例，简述反应基团的导入及常见种类。 上面的聚合物是起支撑和载带作用，并不能直接连上（第一个）氨基酸，必须要在苯环上导入反应基团（接头）。 根据反应基团的不同，介绍我们公司目前常用的几种树脂： Wang Resin 2Cl Trt Resin MBHA Resin Wang Resin Wang Resin的第一个氨基酸装载过程如图： 装载原理： 先用2,6-二氯苯甲酰氯将Fmoc-AA-OH的羧基进行活化，形成Fmoc-AA-Cl。与Wang Resin的-OH在碱性环境(如加入Pyridine)下脱去一分子HCl而缩合形成Fmoc-AA-Wang Resin。 2Cl Trt Resin 是基于三苯甲基的树脂，推荐用于C末端为Cys、His、Pro残基的多肽合成。 2Cl Trt Resin的第一个氨基酸装载过程如图： 装载原理： 利用在碱性环境下(如加入DIPEA)，Fmoc-AA-OH与2Cl Trt resin脱去一分子HCl缩合形成Fmoc-AA-CTC resin. Cys和His连接到基于羟甲基的树脂(wang树脂)的酯化作用存在问题，因为这些氨基酸在较为强烈的反应条件下就易产生消旋。而采用2Cl Trt Resin可以避免此情况，因为连接时没有必要活化Fmoc氨基酸的羧基所以可以完全避免消旋。 基于羟甲基的树脂(wang树脂)连有含Pro的二肽在脱Fmoc保护时易形成环缩二氨酸，致使载体上的肽链损失。而使用2Cl Trt Resin可以减轻这个副反应，由于linker的体积，即使没消除，这些副反应也减少了。 用2Cl Trt Resin合成的肽链可以使用较低浓度的酸从载体上的切割下来，因此可以用来制作一些全保护的肽链片断。 MBHA Resin MBHA树脂基于连有一个对氨甲基苯甲基官能团的100-200个网孔的1%DVB交联聚苯乙烯。这种树脂普遍用于Boc法的多肽合成。氨基酸可通过形成酰氨键的方法（氨基酸可用HBTU等方法活化）连接到树脂的氨基上。切割肽链可用HF方法。得到C末端为酰氨基的肽链。 Rink Amide MBHA Resin 在Fmoc固相多肽合成中，树脂极好的溶胀特性使他成为可以连上一个对TFA敏感的linker用于组合合成。 Rink Amide MBHA Resin由MBHA Resin连接Fmoc保护修饰的Rink Amide linker构成。其连接方法同于普通Fmoc-AA-OH的连接。可采用加入HBTU活化Rink Amide linker在NMM的环境下缩合形成Rink Amide MBHA Resin。 该树脂在肽链合成完成后用TFA切割即可得到C末端为酰氨基的肽链。 Fmoc-AA-resin的取代度测量 前面提到PS树脂上有活性基团。如此每一克树脂上面含有的活性位点毫摩尔数即为树脂的取代度。 在合成完Fmoc-AA-Resin后所作的工作就是测定树脂的取代度。 测取代度原理利用紫外可见分光光度计，测定单位树脂重量所含Fmoc-Pip的吸光度。通过公式计算所得树脂取代度。 ~FIN~ * The Peptide Quality Standard * 用于多肽合成的高分子载体主要有三类： １、交