基因工程1-清华大学.ppt

基因工程原理与应用 清华大学化工系 郭志刚 第1章 引　　言第1节 基因工程的诞生 1. 进化论 Darwin 2. 细胞学说的建立 M. Schleiden and T. Schwann（1839） 3. 遗传学说的建立 1）遗传学说创始 G. Merdel 提出独立分配定律（1865） 2）染色体（chromosome）遗传学说.W. S. Sutton（1903） 3）基因定位 T. H. Morgan 提出连锁定律（1915） 4）基因载体（gene　vector） O. T. Avery，C. M. 　Macleod. and M. McCarty（1944） G4噬菌体的重叠基因图 第3章 基因操作的技术原理 1. 核酸的凝胶电泳 （1）琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺（polyacrylamide） 凝胶电泳 （2）脉冲电场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis） 溴化乙锭染料分子在DNA分子上的插入作用 DNA分子的酶切消化于琼脂糖凝胶电泳 2. 核酸分子杂交 （1）萨瑟恩DNA印记杂交（Southern blotting） Southern DNA 印记杂交X光显像图片 Southern 凝胶转移杂交技术 （2） 诺塞恩RNA印记杂交（Northern blotting） 79年由 J.C.Alwine等人开发出来的 （3）斑点印记杂交和狭线印记杂交（dot blotting and slot blotting） （4）菌落（或噬菌斑）杂交 菌落杂交由M.Grunstein，D.Hogness修改发展出来（75年） 噬菌斑杂交由W.D.Benton，R.W.Davis开发出来（79年） 3. 细菌转化 （1）肺炎链球菌的转化 （2）大肠杆菌的转化 （3）细菌转化频率 4. DNA核苷酸序列分析 （1）Sanger双脱氧链终止法 1）Samger双脱氧链终止DNA测序原理 2) Maxam Gilbert 化学修饰珐 联氨和六氢砒啶在胸腺嘧啶残基位点切割DNA链的化学过程 硫酸二甲脂和六氢砒啶在鸟嘌呤残基位点切割DNA链的化学过程 3）DNA 序列分析的自动化 * 4. 分子生物学 1）DNA双螺旋结构的发现Watson and Crick（1953） 2）DNA复制模式的破解M.Meselson and F. W. Stahl （1958） 3）中心法则的确立F. Crick(1958) 4）密码子（codon）破译F.Crick，S. Brenner等多人 （1961~1966） 5. 基因工程创始 1）SV和入phage DNA重组 P. Berg and H. Boyer （1972） 2）R6-5 质粒和PSC101的DNA重组 S. Cohen（1973） 3）PSC101和非洲爪蟾核糖体DNA重组 S. Cohen and H. Boyer（1973） 第2节 基因工程的定义和主要研究内容 1. 基因工程的定义 1） 重组DNA （recombinant DNA techniques) 2） 分子克隆（molecular cloning) 3） 基因工程 (gene engineering) 4） 基因操作(gene manipulation） 5） 遗传工程 (genetic engineering) 6） 基因克隆（gene cloning） 2. 主要研究内容 1）从生物有机体中分离出带有目的基因的DNA片 段； 2）在体外将带有目的基因的外源DNA片段与能够 自我复制并带有选择性标记的载体分子连接； 3）将重组DNA分子转化到受体细胞或直接用DNA阔增 仪阔增； 4）从大量增殖的细胞群体中筛选出获得重组DNA分子 的受体细胞； 5）克隆这些细胞以阔增目的基因，供进一步分析使用； 6）将目的基因克隆到表