[理学]6分光光度技术.ppt

第6讲分光光度技术 ;What is 光学检测技术?;基本内容;一、紫外-可见光分光光度技术的定义;二、分光光度计的基本组成;1、光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯，发射185～400 nm的连续光谱。 ;2、单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出任一波长单色光的光学系统，由棱镜或光栅构成。;3、样品室 样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。;比色皿;4、检测器 有许多金属能在光的照射下产生电流，光越强电流越大，此即光电效应。 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。 ;二、分光光度计的基本组成;752型分光光度计的使用： 1) 将灵敏度旋钮调到“1”档(放大倍数最小)。 2) 打开电源开关，钨灯点亮，预热30min即可测定。若需用紫外光则打开“氢灯”或“氘灯”开关，再按触发按钮，灯点亮，预热30min后使用。 3) 将选择开关置于“T”。 4) 打开试样室盖，调节0%旋钮，使数字显示为“0.000”。  ; 5) 调节波长旋钮，选择所需测的波长。 6) 将装有参比溶液和被测溶液的比色皿放入比色皿架中。 7) 盖上样品室盖，使光路通过参比溶液比色皿，调节透光率旋钮，使数字显示为100.0%(T)。如果显示不到100.0%(T)，可适当增加灵敏度的档数。然后将被测溶液置于光路中，数字显示值即为被测溶液的透光率。; 8) 若不需测透光率，仪器显示100.0%(T)后，将选择开关调至“A”，调节吸光度旋钮，使数字显示为“000.0”。再将被测溶液置于光路后，数字显示值即为溶液的吸光度。 9) 若将选择开关调至“C”，将已知标定浓度的溶液置于光路，调节浓度旋钮使数字显示为标定值，再将被测溶液置于光路，则可显示出相应的浓度值。 10) 关机。实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比色皿座架及暗??用软纸擦净。;观看视频录像： 1、722型 2、756型 3、 K5600超微量分光光度计;四、注意事项;2) 仪器配套的比色皿不能与其它仪器的比色皿单个调换。如需增补，应经校正后方可使用。 3) 开关样品室盖时，应小心操作，防止损坏光门开关。 4) 不测量时，应使样品室盖处于开启状态，否则会使光电管疲劳，数字显示不稳定。 ; 5) 仪器连续使用时间不应超过2个小时，如要长时间使用，中间应间歇后再用。 6)当光线波长调整幅度较大时，需稍等数分钟才能工作。因光电管受光后，需有一段响应时间。 7)仪器应放置在清洁、干燥、无尘、无腐蚀气体和不太亮的室内，仪器本身也要保持干燥、清洁。;1、标准曲线法 取标准品配制成一系列已知浓度的标准溶液，在选定波长处，用同样厚度的吸收池分别测定其吸光度，作图，得到一条通过坐标原点的直线----------标准曲线。 然后将被测溶液置于吸收池中，在相同条件下，测量其吸光度，根据吸光度即可在标准曲线上查得其对应的含量。 使用时要注意标准溶液和待测溶液在相同条件下进行测量，且溶液的浓度在标准曲线的线性范围内。;;五、测定方法;六、影响因素;七、应用举例;2、紫外分光光度法测定不同厂家替硝唑片的含量 目的：运用紫外分光光度法快速对不同厂家的替硝唑片进行含量测定。 方法：用蒸馏水作空白,在317nm波长处用紫外分光光度计测定吸收度。 结果：替硝唑标准品溶液在10～30μg/ml范围内呈良好的线性关系,r=0.9994（n=8）。平均回收率为99.70%,RSD=0.89%（n=9）。结论：本方法具有快捷、简便、精确及灵敏度好等优点,可快速进行含量测定。;3、紫外分光光度法测定掺假牛奶中的硫氰酸钠含量 采用紫外分光光度法测定掺假牛奶中的硫氰酸钠（NaSCN）的含量,检测波长为455nm,利用硫氰酸钠与三氯化铁反应产物硫氰酸铁的光度值间接测定牛奶中硫氰酸钠含量。 结果显示浓度在2.0—20mg/L范围内与吸光度线性关系良好（r2=0.9993）,加样平均回收率为87.71%,日间变异系数均在4.85%以下。 结论：该方法准确可靠,操作简便,稳定性好。;4、紫外分光光度法测定鹿骨提取液