[理学]动物细胞融合与单克隆抗体.ppt

一、动物细胞融合 1、动物融合的过程 请同学们阅读课本P52动物融合 自主阅读P52：抗体的传统生产方法及缺陷是什么？ B淋巴细胞特点 二、单克隆抗体 大量生产单克隆抗体思路 B淋巴细胞具产生抗体的功能 骨髓瘤细胞具无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 骨髓瘤细胞 * * * 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 （分解弹性纤维） 原代培养 胰蛋白酶 剪碎 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，增殖能力越强，越容易培养。 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 贴壁生长 接触抑制 胰蛋白酶 分瓶培养 10代以内，保持正常二倍体核型 细胞增殖缓慢，核型可能变化 细胞株 遗传物质 未改变 细胞系 遗传物质 改变 动物细胞培养不能最终培养成生物体 动物细胞融合与单克隆抗体 提问： 哪种植物细胞工程技术可以突破不同生物之间的生殖隔离障碍，培育出新的作物类型？　　　　　 植物体细胞杂交技术 你能回忆出植物体细胞杂交的过程吗？ 杂种植株 筛选融合AB 的原生质体 再生出细胞壁 脱分化 愈伤组织 再分化 植物细胞的融合 植物组织培养 植物细胞A 原生质体B 原生质体A 杂种细胞AB 去 壁 去 壁 人 工 诱 导 方法？ 促进融合的方法？ 融合完成的 标志 植物细胞B 植物体细胞杂交技术过程 原理？ 原理？ 动物细胞与植物细胞的差别： 无细胞壁 全能性受限制，不能发育成杂种动物 动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同： 不需去除细胞壁 不能发育成新的动物个体 如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！ 动物细胞也能融合吗？ 问题讨论 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？那动物细胞融合呢？ １、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗? 4、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？ 什么原理？ 5、为什么要用灭活的病毒？ 6、动物细胞融合有什么意义？ 不同DNA的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合 融合后的细胞进行有丝分裂 1、动物细胞融合过程 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法 问题讨论 动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。 １、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 　　不能，只能得到杂交细胞 4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？ 能 ， 还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导 问题讨论 ５、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？ 　　相同，都是细胞膜的流动性 问题讨论 7、动物细胞融合有什么意义？ 6、为什么要用灭活的病毒？ 病毒一般对生物体是有伤害的。 仙台病毒 物理或 化学方法 丧失感染活性 保留融合活性 突破了有性杂交方法的局限，使远源杂交成为可能。 一、动物细胞融合（细胞杂交） 1、概念： 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2、结果： 形成单核的杂交细胞 3、原理： 细胞膜的流动性 4、诱导方式 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒 5、过程： 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 2个完整的杂交细胞AB 有丝分裂 （膜融合、 细胞融合的实质 质融合、 核融合） 单核细胞 注意：动物细胞的融合也需要把多个 两种细胞放在一起，让它们随机融合 后，再从中筛选杂交细胞 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品