[理学]生物化学之核酸的结构与功能.ppt

四、DNA的复性与分子杂交 ?复性；变性DNA在适当条件下，两条互补链可重新恢复天然的双螺旋构象，称为复性。热变性DNA经缓慢冷却后即可复性，也称为退火（annealing）。 ? DNA复性速度受温度的影响。复性时温度缓慢下降才可使其重新配对复性。如加热后将其迅速冷却至4 ℃以下，则不可能发生复性。比Tm低25℃为DNA复性的最佳条件。 核酸的分子杂交(hybridization): 加热 双链DNA 单链DNA 杂交 杂化双链 在DNA复性过程中，双链分子的再形成既可以发生在序列完全互补的核酸分子之间,也可以发生在碱基序列部分互补的不同的DNA之间或DNA与RNA之间，这种现象称为分子杂交。 四、沉降特性 在超离心机强大引力场中，不同构象的核酸沉降速度 差异很大： RNA闭环形质粒DNA开环形及线形DNA蛋白质 离心后，用注射针头从离心管侧面在超螺旋DNA 区带部位刺入，收集这一区带的DNA。用异戊醇抽提收集到的DNA 以除去染料，然后透析除CsCl，再用苯酚抽提1~2 次，即可用乙醇将DNA 沉淀出来。这样得到的DNA 有很高的纯度，可供DNA 重组、测定序列及绘制限制酶图谱等。在少数情况下，需要特别纯的DNA 时，可以将此DNA样品再进行一次氯化铯密度梯度超离心分离。 第七节 核酸酶 ?核酸酶（nucleases）是指所有可以水解核酸的酶，在细胞内催化核酸的降解。 ?按照作用底物的不同，核酸酶分为DNA酶（DNase）和RNA酶（RNase）。 ?有的核酸酶作用在多核苷酸链的5‘末端或3‘末端，因此称为核酸5’末端外切酶（牛脾磷酸二酯酶）或3’末端外切酶（蛇毒磷酸二酯酶）； ?有的核酸酶作用于链的内部，称为核酸内切酶，其中有一部分具有严格的序列依赖性，被称为限制性内切酶。 EcoR I，它识别下列六核苷酸顺序： 习 题 直接参与蛋白质生物合成的RNA是: A、rRNA B、tRNA C、mRNA D、SnRNA E、SnoRNA 习 题 有关DNA变性的描述哪些不对？ A、DNA变性时糖苷键断裂 B、磷酸二酯键断裂 C、变性温度的最高点称为Tm D、A260nm增加 E、双链间氢键被破坏 习 题 有关DNA复性的不正确说法是： A、又叫退火 B、37 ℃为最适温度 C、热变性后迅速冷却可以加速复性 D、4 ℃为最适温度 E、25 ℃ 为最适温度 习 题 DNA的多样性指： A、DNA都是右手螺旋 B、DNA都是左手螺旋 C、温度变化时DNA从右手螺旋变成左手螺旋 D、改变离子强度与温度对DNA构型有影响 E、不同构象的DNA在功能上有差异 习 题 名词解释 核小体 增色效应 Tm 核酶 分子杂交 问答题 用32P标记的病毒感染细胞后产生有标记的后代，而用35S标记的病毒感染细胞则不能产生有标记 的后代，为什么？ 习 题 ?已知人类细胞基因组的大小约30亿bp，试计算一下一个二倍体细胞中DNA的总长度，这么长的DNA分子是如何装配到直径只有几微米的细胞核内的？ ?简述真核生物mRNA的结构特点。 氢键：两条核苷酸链依靠彼此碱基之间的氢键相连而结 合在一起： A与T相配对，形成两个氢键：A（N6）--T（O4） A（N1）--T（N3） G与C相配对，形成三个氢键：G（N2）--C（O2） G（N1）--C（N3） G（O6）--C（N4） 上述碱基之间的配对原则，称之为碱基互补。 T == A C ≡≡ G 2、Dickerson十二聚体（人工合成）的补充： （1）两个核苷酸之间的夹角并非都是36，可由28至42不等， 实际平均每一螺周含10.4个碱基对； （2）组成碱基对的两个核苷酸的分布并非在同一平面上，而 是碱基对沿长轴旋转一定角度，从而使碱基对的形状像 螺旋桨叶片的样子，故称为螺旋桨状扭曲。这可提高碱 基堆积力，使DNA