[理学]第一章 蛋白质1-7性质_分离提纯.ppt

1．7 蛋白质的性质 蛋白质的性质与其分子大小、结构及其组成——aa的性质密切相关。 (一）分子量 Mr：道尔顿 Pr为高分子有机物，分子量几千—几千万。 分子量测定方法：渗透压法； 超速离心法； 凝胶过滤法(分子筛）； SDS-聚丙烯酰胺电泳法(SDS)等。 分子量测定 PAGE 分子筛 电荷效应 浓缩效应 SDS- PAGE 分子筛 浓缩效应 SDS- PAGE 普通蛋白质电泳的泳动速率取决于荷质比（净电荷、大小、形状）； 用SDS和巯基乙醇（打开二硫键）处理蛋白质变性（肽链伸展）并与SDS结合，形成SDS-蛋白质复合物； 不同蛋白质分子的均带负电（SDS带负电）；且荷质比相同（蛋白质分子大，结合SDS多；分子小，结合SDS少）； 不同蛋白质分子具有相似的构象； 用几种标准蛋白质相对分子质量的对数值对它们的迁移率作图，测出待测样品的迁移率，从标准曲线上查出样品的相对分子质量。 分子量测定 根据化学成分测定最小相对分子质量： 此法首先利用化学分析方法测定蛋白质分子中某一特殊成分的百分含量然后，假定蛋白质分子中该成分只有一个，据其百分含量可计算出最低相对分子质量； 最小相对分子质量＝（已知成分的相对分子、原子质量）/已知成分的百分含量； 如果蛋白质分子中所含已知成分不是一个单位，则真实相对分子质量等于最小相对分子质量的倍数。 分子量测定——超速离心法 在60 000～80 000r/min的高速离心力作用下，蛋白质分子会沿旋转中心向外周方向移动； 用光学方法测定界面移动的速度即为蛋白质的离心沉降速度，蛋白质的沉降速度与分子大小和形状有关。 沉降系数是溶质颗粒在单位离心场中的沉降速度，用S表示。 一个S单位，为1×10-13秒。相对分子质量越大，S值越大。蛋白质的沉降系数：1～200S。 根据斯维得贝格〔Svedberg〕方程计算蛋白质分子的相对分子质量： M=RST/D〔1－iρ〕 R：气体常数 T：绝对温度 D：扩散系数 ρ：溶剂的密度 分子量测定——超速离心法 分子量测定——凝胶过滤法 凝胶过滤所用介质为凝胶珠，其内部为多孔网状结构； 一定型号的凝胶网孔大小一定，只允许相应大小的分子进入凝胶颗粒内部，大分子则被排阻在外； 洗脱时大分子随洗脱液从颗粒间隙流下来，洗脱液体积小；小分子在颗粒网状结构中穿来穿去，历程长，后洗脱下来，洗脱体积大； 测定蛋白质分子量一般用葡聚糖，商品名：Sephadex； 测得几种标准蛋白质的洗脱体积〔Ve〕；以相对分子质量对数（logM）对Ve作图，得标准曲线； 再测出未知样品洗脱体积〔Ve〕；从标准曲线上可查出样品蛋白质的相对分子质量。 分子量测定——凝胶过滤法 （二）两性电离与等电点 应用电泳法： 分离各种蛋白质；鉴定蛋白质的纯度。 此多用于科研、生产、临床诊断等。 （三）胶体性质 蛋白质水溶液为亲水胶体。 不能通过半透膜； 分子周围有同种电荷和水化膜，有利于稳定pr胶体系统。水化膜、同种电荷 （四）呈色反应 反应 试剂 颜色 反应基团 双缩脲反应 NaOH,稀CuSO4 紫或粉 2个以上肽链 Millon反应 Millon,硝酸，亚硝酸 红色 酚基 黄色反应 HNO3及NH3 黄、橘黄 苯环 乙醛酸反应 乙醛酸H2SO4 紫红 吲哚 坂口反应 次氯酸钠,萘酚，NaOH 红色 胍基 Folin酚试剂反应 CuSO4磷钨酸-钼酸 兰色 酚基 茚三酮反应 茚三酮 紫兰色 游离氨羧基 双缩脲反应 两分子双缩脲与碱性硫酸铜作用，生成粉红色的复合物；含有两个或两个以上肽键的化合物，能发生同样的反应； 肽键的反