[理学]第五章 分子发光分析法.ppt

5-3 分子荧光定量分析方法 1）工作曲线法 适用于大批量样品的测定 2）比较法 3）多组分混合物的荧光分析 互不干扰 互相干扰但激发光谱有显著差别，分别采用不同的激发光激发 同一激发光波长下荧光光谱相互干扰，可利用荧光强度的加和性，在适宜的荧光波长处测定，利用列联立方程的方法求结果 5-4 化学发光分析法 1）基本理论 基本要求： ⅰ化学反应必须提供足够的化学能，且被发光物质吸收形成电子激发态，化学发光反应大多数是有H2O2，O3等参加的高能氧化还原反应 ⅱ吸收化学能处于电子激发态的分子返回到基态时，能以光的形式释放能量，或把能量转移到一个合适的接受体上，该接受体能以光的形式释放能量----敏化发光 气相、液相固相化学发光 异相化学发光 电生化学发光 2) 化学发光效率：ΦCL 3）化学发光的强度与反应物浓度间的关系 激发态分子的产率和激发态分子的发光效率的乘积 4）灵敏度和检出限 b. 化学发光分析的主要类型 1）液相化学发光 a. 鲁米诺体系 +hγ b. 光泽精体系 用光泽精（N,N-二甲基-9,9‘-联丫啶二硝酸盐）做化学发光探针 N,N-二甲基-9,9‘-联丫啶二硝酸盐在碱性溶液中与H2O2反应生成激发态的N-甲基吖啶酮，产生最大发射波长为470nm的化学发光 可测定Fe2+,Fe3+,Cr3+,Mn2+,Ag+等 尤其是Pb2+,Bi3+等离子 还可测定丙酮，羟胺，果糖，维生素C，谷胱甘肽，尿素，肌酸酐，和多种酶 可测定人体全血中吞噬细胞的活性 可测定甲醛，甲酸，H2O2，葡萄糖，氨基酸，多环芳胺类化合物和Zn2+,Cr6+,Mo6+,V5+ 2)气相化学发光 广泛用于大气污染的检测 常温下呈气态的氰化物，硫化物，氮化物，臭氧，和乙烯等 在火焰中易生成气态原子的P,N,S,Te和Se 例： NO+O3 NO2*+O2 NO2* NO2+hγ(≥600 nm) c. 化学发光分析仪器 1）分立取样式液相化学发光仪 2）流动注射式化学发光 d. 生物化学发光分析法简介 发生在身物体内有酶参与的化学发光现象，P 118自学 5-5 分析发光分析法的应用 1)无机化合的荧光分析 2）有机化合物的荧光分析 复习 4-1 红外吸收光谱法的基本原理 4-2 红外吸收光谱与分子结构的关系 4-3 红外吸收光谱仪 4-4 红外吸收光谱法的应用 4-1红外吸收光谱法的基本原理 4-1-1 红外光谱的产生 4-1-2 分子振动与红外吸收峰 4-2 红外吸收光谱与分子结构的关系 4-2-1 基团的特征吸收峰与相关峰 4-2-2 影响基团频率的因素 4-2-3 常见化合物的特征基团频率 4-3 红外吸收光谱仪 4-4 红外光谱法的应用 第五章 分子发光分析法 目录 1 5-1 分子荧光分析法及其基本原理 2 5-2 荧光分析仪器 5-3 分子荧光定量分析方法 3 5-5 分子发光分析法的应用 5 5-4 化学发光分析法 4 物质分子吸收了外界能量后，从基态跃迁到激发态，当处于激发态的分子以辐射跃迁的方式返回基态时，就产生了分子发光。 A 光致发光(PL) B 生物发光(BL) C 化学发光（CL） D 电致发光（EL） 分类 本章主要讨论荧光、磷光、化学发光和生物发光这几种分子发光分析方法。 5-1-1荧光和磷光光谱的产生 具有不饱和基团的基态分子光照后，价电子跃迁产生荧光和磷光 基态分子 价电子跃迁到激发态 光照激发 去激发光 ?* ? ? ?* ?n 基 态 在光致激发和去激发光的过程中，分子中的价电子（ ?、n电子）处于不同的自旋状态，通常用电子自旋状态的多重性来描述。 5-1 分子荧光分析法及其基本原理 （1）电子自旋状态的多重性 单重态： S0 ----------S1， S2, S3, 三重态： T1, T2, T3 多重态的不同性质： a.S态分子在磁场中不发生能级分裂，有抗磁性，而T态具有顺磁性； b.电子在不同多重态间跃迁时需换向，不易发生，因此S与T态间的跃迁概率总比单重态与单重态间跃迁概率小， c.激发单重态电子相斥比激发三重态强，所以各能态能量高低为S2T2S1T1S0 d. 受激S态和T2态的寿命很短，而亚稳态T1的平均寿命在10-4~10s 1 振动弛豫 （VR）：热传递， 产生振动弛豫的时间----- 10-12s 3 系间窜跃 （ISC）：不同多重态之间的无辐射跃迁 2 内转换（IC ）：同一多重态的不同电子能级间无辐射去激过程 (2)无辐射跃迁 同一电子能级 不同电子能级 不同多重态 （3）分子荧光和磷光的产生及其类型 ⅰ分子荧光：分子从S