[生物学]2蛋白质药物的分离纯化与化学修饰.ppt

PEG修饰的位点反应动力学 PEG醛修饰药用蛋白的优化反应 单修饰产物的分离纯化 P1 P2 分离产物分析 6.5 14.3 29.0 66.4 20.1 116 200 KDa 44.3 P1 P2 P1凝胶过滤分析 膜耦合修饰工艺制备PEG化药用蛋白 五、PEG修饰产物的质量控制 IEF和SDS鉴定PEG修饰蛋白 1 2 3 4 + - Iodine stain Comassie blue stain SDSIEF 1: Marker, 2: HbA, 3: ??-Hb 4: (Propyl-PEG5K)6-Hb 5: (Propyl-PEG5K)6-??-Hb 1: HbA, 2: ??-Hb 3: (Propyl-PEG5K)6-Hb 4: (Propyl-PEG5K)6-??-Hb 1 2 3 4 4 5 5 94.0 66.2 43.0 31.0 20.1 14.4 RP-HPLC分析胰蛋白酶切片段 质谱分析胰蛋白酶切片段 MALDI-TOF/TOF分析 PEG修饰位点在Val-1(?) PEG修饰蛋白的结构鉴定 圆二色光谱鉴定 荧光光谱鉴定 RP-HPLC分析PEG修饰蛋白 蛋白质修饰剂及其制备方法和用途,中国发明专利， Z5 制备分枝型聚乙二醇的新方法,中国发明专利， Z2 带PEG长尾的蛋白质修饰剂的制法和用途,中国发明专利， ZL031100736.8 聚乙二醇羧酸的制备方法和其用途 ,中国发明专利， ZL 200310113367.6 重组人复合干扰素-聚乙二醇偶联物的制备及其偶联产物,中国发明专利， ZL 200410029577.1 一种蛋白质交联剂及其交联方法,中国发明专利， ZL4 一种分级分离制备血红蛋白偶联物的方法,中国发明专利， ZL0 一种二醇聚合物—动物血红蛋白偶联物的制备方法,中国发明专利， ZL9 一种二醇聚合物—动物血清白蛋白偶联物的制备方法,中国发明专利 ZL2 分子量均一的聚合物血红蛋白的制备方法,中国发明专利 ZL5. 血红蛋白--人血清白蛋白偶联物制备血液代用品及其制备方法,中国发明专利， ZL0 蛋白质修饰国家发明专利11项（已授权） PEG修饰的SCI论文 Q Yun, T Chen, G Zhang, J Bi, G Ma , Z Su. A novel polyethylene glycol derivative suitable for the preparation of mono-PEGylated protein. Biotech Lett, 27, 213-217, 2005 Q Yun, R Yang, T Chen, J Bi, G Ma, Z Su. Reproducible preparation and effective separation of PEGylated recombinant human granulocyte colony-stimulating factor with novel “PEG-pellet” PEGylation mode and ion-exchange chromatography. J Biotech. 2005, 118:67-74 Q Yun, M He, W Xing, J Bi, G Ma, Z Su, A novel tetrafunctional reagent for simultaneous intramolecular and intermolecular cross-linking of bovine hemoglobin, Biotech Lett 26: 1359-1363, 2004. X Li, F Meng, G Ma , Z Su, A simple and efficient method for synthesis of carboxymethylated polyethyleneglycol. J Chem Res, In press. J Zhang, Y Zhao, Z Su, G Ma, Synthesis of Monomethoxy Poly(ethylene glycol) without Diol Poly(ethylene glycol), J Appl Polym Sci, 105, 3780–