[生物学]基因工程201212.ppt

通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里， 地改造生物的 。 基因表达载体的构建——核心 下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有 ▲ 个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 ▲ 。 （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是 ▲ 。 （4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 ▲ 。 （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 ▲ 酶。 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 ▲ 。 思考？ 1、基因工程技术的发展给人类带来的影响？ 2、基因工程技术在应用中存在的主要问题？ 3、基因工程技术的发展方向？ 作业： 1、基因工程的基本过程？ 2、获取目的基因的方法？ 3、DNA片段如何与载体连接? 基因工程技术路线2 * 学生：336班 教师：任俐 基因拼接技术或DNA重组技术 定向 遗传性状 概念： 定向地改 造生物的 遗传性状 生物 体外 DNA 分 子水平 基因 基因 重组 基因拼接 技术或 DNA 重 组技术 结果 (目的) 操作 环境 操作 水平 操作 对象 原理 基因工 程别名 基因工程的理解 二、基因工程最基本的工具 基因的剪刀--------- 基因的针线---------- 基因的运输工具----- 限制性核酸内切酶（限制酶） DNA连接酶 运载体 产生黏性末端（平末端） 4000多种 粘性末端 平末端 用EcoRⅠ酶切 （1）用DNA连接酶连接两个相同的黏性末端要连接几个磷酸二酯键？ 质粒、噬菌体和动植物病毒 质粒 DNA分子 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA 连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 限制酶 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 基因表达载体的组成： 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 在基因工程操作的基本步骤中，没有 进行碱基互补配对的是( ) C A．人工合成目的基因 B．目的基因与运载体结合 C．将目的基因导入受体细胞 D．目的基因的检测表达 解析：将目的基因导入受体细胞有基因枪法、显微注射法 等，都没有进行碱基互补配对。 可以推知外源基因(目的基因)是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，下表是外源基因插入位置(插入点有 a、b、c，a 为抗氨苄青霉素基因，b 为抗四环素基因)，请根据表中提供细菌的生长情况，推测①②③三种重组后细菌的外源基因插入点正确的一组是( ) 【典例1】质粒是基因工程中最常用的运载体，它存在于许多细菌体内。质粒上有标记基因如下图所示，通过标记基因 能生长 不能生长 ③ 不能生长 能生长 ② 能生长 能生长 ① 细菌在含四环素培养基上的生长情况 细菌在含氨苄青霉素培养基上的生长情况 A.①是 c，②是 b，③是 a B．①是 a 和 b，②是 a ，③是 b C．①是 a 和 b，②是 b，③是 a D．①是 c，②是 a，③是 b [答案]A [解题思路]第一步 提取隐含信息：插入的位点如果破坏 了基因的完整性，则基因无法表达。 第二步 分析选项：①项两个标记基因都正常，说明插入 位点是 c 点；②项不能在含四环素的培养基中生长，说明插入 位点在 b；③项不能在氨苄青霉素培养基上生长说明插入位点 在 a。 [答案]A 【答案】（1）0、2（2）高（3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 （4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化（5）DNA连接（6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞 四、.