[生物学]培养基制备灭菌+实验.ppt

试管的分装 试管的捆扎 摆斜面 移液管包装方法２ 移液管包装方法３ 7、培养基的灭菌 （1）含糖类或明胶的培养基： 113℃灭菌15分钟或115℃灭菌10分钟。 （2）无糖培养基： 121℃灭菌15~20分钟。 （3）血液、体液和抗生素等以无菌操作技术抽取后再加入冷却至约50℃左右的培养基中。 （4）琼脂斜面培养基应在灭菌后冷至55℃-60℃时取出，再摆置成适当斜面。 8、培养基的质量测试 （１）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。 （２）将全部培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。 （３）用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基，培养24～48小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。 9、培养基的保存 （1）基础培养基不能超过两周 （2）生化试验培养基不宜超过一周， （3）选择性或鉴别性培养最好当天使用，倾注的平板培养基不宜超过3天。 培养基配制 – 器材 培养基、玻璃器皿天平秤、药匙 培养基配制—仪器 杀菌锅 (Autoclave) 超净工作台 (Laminar flow) 培养基的配制 – 装水 以量桶裝取适当的蒸馏水于玻璃容器中 玻璃容器上标示培养基名称 培养基配制– 称量 放上秤药纸并归零 以秤钥匙舀出适当量培养基 培养基配制 – 溶解培养基 倾倒培养基时小心不要沾到玻璃壁上 注意事项– 配药結束 清理配药桌面与天平 清洗秤药匙，擦干放回 药品放回药品柜 培养基配制 – 分装 调整分注器 (Dispensette) 刻度 分装试管 盖上试管盖 放入杀菌锅 (Autoclave) 灭菌 培养基配制 – 灭菌 加水盖过铁板 放東西 关门 调整温度时间 关紧洩压法 注意事项 – 杀菌锅的使用 注意事项 – 灭菌锅使用 灭菌結束后，等压力降回零時才可打开门 进入物品，盖子不可关太紧或太松 注意事项– 灭菌锅使用 拿灭菌后物品请记得带耐热手套 培养基配制 – 平板培养基 灭过菌之固态培养基于无菌操作台 (Laminar flow)內倒制平板培养基 (Plate) 日光燈 UV燈 風扇 培养基灭菌材料数目/组 牛肉膏蛋白胨培养基：４00mＬ 豆芽汁葡萄糖培养基：４00ml 马铃薯葡萄糖培养基：４00ml 90ml无菌水（放5~8颗玻璃珠）：1瓶 ９ml试管无菌水：8支 空试管：１2支，装3种培养基（每种1支），4个学生共12支 平皿：３１个（3种培养基*9个，划线4个=31个） 0.1ml移液管：６支 １ml移液管：８支 10mL移液管：3支 以上都需要包扎灭菌 其中每个培养基分装１支于试管中(１０mＬ) 提前准备的样品 可以选择：霉变物品（面包、馒头、茶叶等） 土壤（必须） 土壤取样原则： 深度：5~２５cm土壤内 先用灭菌刀或铲除去土壤的表层，再用灼烧过的勺采取土壤200-300g，置于无菌容器内，标明：采取地点、深度、日期和时间 将土壤置于乳钵中研磨均匀。取10g * * 50左右加入血液是为了保存其中某些不耐热的营养物质和血细胞的完整，琼脂不凝固 * 第二节培养基 ????? 培养基medium 是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物营养基质。 (一) 培养基配制原则 P59 1.目的明确：根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。 2.营养协调：注意营养物质的浓度比和C/N比。 （C/N比是指在微生物培养基中所含的碳源中的碳原子摩尔数与氮源中的氮摩尔数之比） 3.理化适宜：调节适宜的pH值。 pH 的内源调节：借磷酸缓冲液进行调节；以碳酸钙作备用碱进行调节。 4.经济节约：根据培养微生物的目的决定成分的量。以粗代精，以野代家，以废代好，以简代繁，以纤代糖，以国代进等等。 （二）培养基的类型 P62 培养基 合成培养基 半合成培养基 天然培养基 营养物资来源 由已完全知道成分和浓度的化学药品配成, 成分精确，重复性强，多用于实验室,费用较高 由成分已知的物质和成分未知的天然物质配制而成，使用最多。 化学成分不完全了解或不恒定的天然有机物配制。如动植物汁液,土壤浸出液等配制，方便，经济 例如 高氏一号培养基(淀粉硝酸盐培养基)－－－放线菌 察氏培养基(蔗糖硝酸盐培养基)－真菌 马铃薯蔗糖培养基－－－真菌 牛肉膏蛋白胨培养基－－－细菌 麦芽汁培养基 －－－酵母菌 根据营养物质来源不同分为 牛肉膏 瘦牛肉组织浸出汁浓缩而成的膏状物质，富含水溶性碳水化合物，有机氮化合物，维生素，盐等。 蛋白胨 将肉，酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干