[生物学]第五章 抗体制备技术.ppt

第六章 抗体制备技术 抗体的一些基本概念 多克隆抗体（Polyclonal Antibody）： 即多个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体 单克隆抗体（Monoclonal Antibody）： 即由单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体 Epitopes on the surface of pathogens Viral surface protein epitopes Whole Virus particle surface of proteins 多克隆抗体的特点 制备方便，操作简单，可大量产生 容易发生沉淀反应，出现沉淀线 异质性： 抗体种类多样，化学组成复杂，含有较多的无关Ig 存在针对多种抗原或一种抗原不同表位的一系列亲和力不同的抗体 重复性差，批间差异很大 免疫原需要纯化 易出现交叉反应 单克隆抗体的特点 高度均质（同一亚类），化学组成均一，不含 或很少含无关Ig 特异性强，只针对一种抗原表位 亲和力强 抗原用量少，无需纯化 无批间差异 来源稳定，可大批生产，容易标准化 不易形成沉淀线 操作比较麻烦 多克隆抗体与单克隆抗体区别 什么情况需要制备单抗 目的蛋白有结构类似物 抗原不纯，无法分开 多抗效果不好（已排除非特异性反应） 希望将抗体用于治疗，研制成药品 希望将抗体用于诊断，研制成诊断试剂 单克隆和多克隆抗体的比较和用途 特异性 敏感性 均一性 McAb PcAb 低 差 无 高 强 有 1. 用于免疫学检测，辅助临床诊断 2. McAb用于亲和层析，分离微量可溶性抗原 3. 标记的McAb用于基础研究，了解细胞分化等 4. 制备生物导弹用于肿瘤、移植等的临床治疗 抗体名称 抗体种类 靶向抗原 适应症 批准日期 OKT3 鼠单抗 CD3 移植排斥 1986 Panorex 鼠单抗 17-1A 大肠癌 1995（德国） ReoPro 人-鼠嵌合Fab 血小板受体 冠心病 1994 ⅡbⅢa Rituxan 人-鼠嵌合抗体 CD20 淋巴瘤 1997 Simulect 人-鼠嵌合抗体 CD25 移植排斥 1998 Remicade 人-鼠嵌合抗体 TNF-α 炎症性肠病、 1998 类风湿关节炎 1999 Zanapax 人源化抗体 CD25 移植排斥 1997 Herceptin 人源化抗体 HER-2 乳腺癌 1998 Synagis 人源化抗体 RSV F蛋白 RSV感染 1998 Mylotarg 人源化抗体 - CD33 淋巴瘤 2000 化疗药物交联物 Campath 人源化抗体 CD52 淋巴瘤 2001 已批准上市的治疗性单抗 购买抗体时要注意厂商的标注 适合于做什么实验，使用浓度多少？ WB（Western blotting，免疫印迹） IH（Immunohistochemistry, 免疫组织化学） IC（Immunocytochemistry, 免疫细胞化学） IEM（Immune lectron microscopy，免疫电镜） FCM（Flow Cytometry，流式细胞仪） ELISA（enzyme linked immunosorbent assey, 联免疫吸附实验，联免疫分析） 第一节 多克隆抗体制备技术 第二节 单克隆抗体制备技术 第三节 基因工程抗体制备技术 第四节 抗体库技术 第六章 抗体制备技术 第一节 多克隆抗体制备技术 第二节 单克隆抗体制备技术 第三节 基因工程抗体制备技术 第四节 抗体库技术 第六章 抗体制备技术 第一节 多克隆抗体制备技术 一、多克隆抗体制备的原理 二、多克隆抗体制备的基本条件 三、多克隆抗体制备的基本方法 第一节 多克隆抗体制备技术 一、多克隆抗体制备的原理 二、多克隆抗体