[畜牧兽医]2生物技术知识《蚕桑生物技术》之一B.ppt

山东农业大学 三、转基因育种的技术体系 重组DNA ?入植物 ? 培养再生? 选择转化体? 新品种 技术体系包括： 1 、重组DNA技术： 目的基因的制备 所用载体 A 克隆载体：E.coli 的多拷贝小质粒，保存和克隆目的基因 B 中间克隆载体：在大肠杆菌质粒中插入T-DNA片段、目的基因和标记基因，是构建中间表达载体的基础。表达载体含植物特异启动子的中间载体，是作为构建转化载体的基础。 C 卸甲载体：解除Ti、Ri致瘤，构建转化载体的受体质粒 D 转化载体：导入目的基因的载体，由卸甲载体和中间表达载体构建而成。根据其结构特点又可分为一元载体系统和双元载体系统，T-DNA与Vir基因是否在两个独立的质粒上 三、转基因育种的技术体系 2、遗传转化技术 ①重组DNA导入植物细胞或组织： 载体转化系统 直接转化系统 种质转化系统 评价转化方法的指标： A转化率；B工作效率；C适用范围；D重复性；E操作；F获得转基因植株的速度。 三、转基因育种的技术体系——2、遗传转化技术 ②转化体的筛选：培养基中施加选择压 ③转化体的鉴定 认可转基因植物的证据应包括以下几个方面 A 有严格的对照（包括阳性和阴性对照） B 外源基因整合和表达的分子生物学证据（PCR、Southern、Northern、Western杂交、ELISA） C 外源基因控制表型性状的证据 D 根据植物的繁殖方式提供遗传证据 三、转基因育种的技术体系 3、组织培养的再生技术 建立组织培养系统 ? 转化体的筛选与植株再生 ①外植体：幼年型；增殖能力强；萌动期；强再生能力基因型；遗传稳定性 ②培养基：A 各类培养基的特点； B背景调查； C选择原则：物种；器官；营养成分与栽培条件的相似性；MS通用性；无机盐应作为主要参数；有机成分种类、含量；蔗糖浓度；磷酸根；水解酪蛋白 D激素：生长素和细胞分裂素 浓度和比例 ③培养条件：光照和温度 ④抗生素的敏感性试验：筛选、抑菌 ⑤受体对农杆菌的敏感性 三、转基因育种的技术体系 4、转化体的选择技术 在得到转基因植株并确认目的基因稳定表达后，在控制条件下的中间试验及与生产性试验相结合进行选择，既要考虑目的基因的表达性状，又要兼顾优良的农艺性状，直至形成新品种，进行商品化生产。 四、转基因改良的性状 自从1983年得到第一个烟草转基因植物至今，通过转基因改良的植物性状已达40多种，主要有抗除草剂、抗逆性（抗虫、抗病毒病、抗真菌病、抗细菌病、抗旱与耐盐）、品质性状、经济性状、标记抗性。 五、转基因植物的安全性评价 安全性评价的必要性 目前科学技术发展水平不能精确地预测转基因可能产生的所有表型效应（基因工程产品对人类及环境的安全性），要求采取必要措施，防患于未然。 美国及一些发达国家对此项工作开展的较早，我国在进入九十年代后才开始重视此问题。1993年12月国家科委颁布了《基因工程安全管理办法》，1996年7月农业部颁布了《农业生物基因工程安全管理实施办法》。2002.3.20 新规定 1、目的：促进研究与开发，防止遗传工程体及其产品对人类健康、人类赖以生存的环境和农业生态平衡可能造成的危害。 2、项目类别：实验研究、中间试验、环境释放、生产性实验、安全证书 3、申请转基因植物进入田间试验或环境释放应提供的资料：A受体植物的生物学特性；B基因操作的安全性；C转基因植物的生物学特性；D释放地点的生态、环境资料；E检测方法及控制措施。 4、安全性等级及审批 5、结果反馈 受理日期：每年6/31和12/31 反馈：受理后三个月通知结果 六、转基因植物的商品化 1983年得到第一个转基因烟草 转基因成功的植物种类已达35科120多种 覆盖植物类别：粮食作物、蔬菜、观赏植物、药用植物、水果、林木和牧草植物等。 1986年首批转基因植物进入田间试验 1994年首先批准了转基因延迟成熟番茄的商品化生产 1998年底美国已有30个转基因植物品种得到应用 2001 年全球有5百50万农民种植，面积突破5000万公顷 2008年全球转基因作物种植面积增至1．25亿hm2 七、转基因植物研究中应注意的问题 农艺性状变异 目标性状表现的稳定性 标记基因 生态安全性 食品安全性 2、转基因植物的商品化 * 生 物 技 术 知 识 《蚕桑生物技术》之一 讲课内容： 植物转基因育种研究进展 遗传转化中常用的标记基因 转基因抗虫植物研究进展 SARS病毒疫苗研制的策略 酵母双杂交系统 植物功能基因组研究技术 蛋白质组学及其研究技术（1、2） 作业：每人提交课程论文1篇，并做报告 一、植物育种的基本内涵 变异=======