L-天冬酰胺酶.ppt

酶类药物L-天门冬酰胺酶 主讲人：李进粮 曾琪 组 员：王朋 朱丹 L-天门冬酰胺酶是酰胺基水解酶，用于治疗白血病。 L-天门冬酰胺的理化性质： 又称天门冬素，L-天冬酰胺等。由大肠杆菌培养液提取的L-天(门)冬酰胺基水解酶，白色粉末，略有吸湿性。溶于水，不溶于丙酮、三氯甲烷、乙醚及甲醇。通常以单水合物存在，斜方半面形结晶，熔点234～235℃；(加热浴预热至226℃)，相对密度1.543，对石蕊显酸性。旋光度-9.3°(c=1mol/L，氢氧化钠)，旋光度+20.0°(c=1mol/L，盐酸)天然存在于百合科植物的块根等部位中。水溶液20℃贮存7天或5℃贮存14天均不失活；干品50℃15min活力降低30％，60℃ 1h内失活。 它催化天冬酰胺水解产生天冬氨酸和氨。急性淋巴细胞白血病患者缺乏天冬酰胺合成酶，不能合成天冬酰胺，如果把天冬酰胺酶注射于血中，影响肿瘤组织中天冬酰胺供应，致使蛋白合成不能顺利进行，使肿瘤消退。 用途：能增强造血系统的功能，用于防治由于放射性照射、化学芗所引起的白细胞养活症及血小板减少症、再生障碍性贫血等。类别：抗癌药 分子式：C4H7NO4分子量：133.1 L-天门冬酰胺酶的结构式 一、结构： 由四个相同亚基组成，有222个对称轴，每个亚基含326个氨基酸残基。 用于儿童急性淋巴细胞白血病 、单细胞白血病、淋巴肉瘤、胰腺癌等。 机理： 降低人体内天冬酰胺和谷氨酰胺浓度，正常细胞可自我合成，癌细胞不具备这种能力，从而受到抑制。 知识链接： 被称为蔬菜之王的芦笋营养价值最高，除了能佐餐，增食欲，助消化，补充维生素和矿物质外，应含有较多的天门冬酰胺，天门冬氨酸及其他多种甾体皂苷物质，可防癌抗癌，对心血管病，水肿，膀胱等疾病均有疗效。现代营养学分析，芦笋蛋白质组成具有人体所必须的各种氨基酸，含量比例恰当。用芦笋治淋巴腺癌，膀胱癌，肺癌肾结石和皮肤癌有极好的疗效，对其他癌症，白血病等也有很好的效果。 芦笋做法指导：1. 芦笋虽好，但不宜生吃，也不宜存放1周以上才吃，而且应低温避光保存。2. 芦笋中的叶酸很容易被破坏，所以若用来补充叶酸应避免高温烹煮，最佳的食用方法是用微波炉小功率热熟。芦笋适合人群：一般人群均可食用。因其含有少量嘌呤，痛风病人不宜多食。  福建省漳州市漳浦县佛潭镇白石村是漳浦最早种植发展芦笋的地方，现有近万亩的芦笋种植基地。白石芦笋由于质量好，具有株梃、色白、肉嫩、味香等独特优点，除制作罐头和芦笋茶外，是名贵的蔬菜，食之清爽可口，被誉为“龙须菜”，其加工后的产品远销美国、日本，深受欢迎。它富含蛋白质、维生素、和矿物质等，对高血脂、冠心病、动脉硬化等有辅助疗效。白石芦笋是漳浦一大特产，也是漳州特产、闽南特产之一。1999年被中国特产之乡推荐暨宣传委员会命名为：“中国芦笋之乡”。 天冬分布于西南、华南、华中等地，主产于贵州、四川、重庆、广西等地，重庆的武陵山区为我国优质天冬品种的分布中心。又名天门冬、明冬，为百合科常绿藤本植物，以块根入药。 二、生产工艺 1 工艺路线 2 工艺过程及控制要点 (1)菌种培养 采取大肠杆菌AS1-375，普通牛肉培养基，接种后于37℃培养24h。 (2) 种子培养 16％玉米浆，接种量1％～1.5％，37℃通气搅拌培养4～8h。 (3)发酵罐培养 玉米浆培养基，接种量8％，37℃通气搅拌培养6～8h，离心分离发酵液，得菌体，加2倍量丙酮搅拌，压滤，滤饼过筛，自然风干成菌体干粉。 (4) 提取、沉淀、热处理 每千克菌体干粉加入0.0lmol／L pH8.0的硼酸缓冲液l0L 37℃保温搅拌1.5h，降温到30℃以后，用5mol／L醋酸调节pH4.2～4.4进行压滤，滤液中加入0.2倍体积的丙酮，放置3～4h，过滤，收集沉淀，自然风干，即得干粗酶。 取粗制酶，加入0.3％甘氨酸溶液，调节pH8.8，搅拌1.5h，离心，收集上清液，加热到60℃30min进行热处理。离心弃去沉淀，上清液加2倍体积的丙酮，析出沉淀，离心，收集酶沉淀，用0.01mol／L，pH8.0磷酸缓冲液溶解，再离心弃去不溶物，得上清酶溶液。 (5)精制、冻干 上述酶溶液调节pH8.8，离心弃去沉淀，清液再调pH7.7加入50％聚乙二醇，使浓度达到16％。在2～5℃放置4～5天，离心得沉淀。用蒸馏水溶解，加4倍量的丙酮，沉淀，同法反复1次，沉淀用pH6.4，0.05mol／L磷酸缓冲液溶解，50％聚乙二醇反复处理1次，即得无热原的L—天门冬酰胺酶。溶于0.5mol／L磷酸缓冲液，在无菌条件下用6号垂熔漏斗过滤，分装，冷冻干燥制得注射用L—天门冬酰胺酶成品，每支1万或2万单位 3 检测方法