复杂性疾病的分子诊断.ppt

分子诊断在肿瘤中的临床意义 肿瘤的分类 判定淋巴细胞增生与淋巴细胞性肿瘤及其克隆起源，用常规病理组织学方法不易区分 限制性酶切片段长度多态性，分析免疫球蛋白或T细胞受体基因的重排情况，则可进行鉴别诊断 B细胞起源的淋巴瘤常有Igμ链或者κ链的基因重排 T细胞起源的淋巴瘤则常有TCRα链或者β链的基因重排 分子诊断在肿瘤中的临床意义 肿瘤的早期诊断 K-Ras基因突变是一种在胰腺癌、结肠癌和肺癌中发生率较高的分子病变事件 细针穿刺活检材料检测胰腺癌第12编码子突变，捡出率达100％ 用RT-PCR方法检测结肠癌患者粪便中Ras基因突变，检出率与肿瘤组织中的检测率相似，达到33 .3％ 因分子诊断方法可进一步简化，成本降低，可用于高危人群的筛选和临床检测，如大肠癌肠镜检查前肠道清洗粪便中的DNA K-Ras基因突变，筛选大肠癌高危人群，检出率可达18％。 分子诊断在肿瘤中的意临床意义 肿瘤的预后判断 肿瘤相关基因的突变、扩增及过表达等改变常常与肿瘤的预后密切相关 P53基因突变与乳腺癌、肝癌、结肠癌等多重肿瘤预后相关 肿瘤转移抑制基因nm23与肿瘤转移相关 分子诊断在肿瘤中的临床意义 肿瘤的个体化和预见性治疗 肿瘤的发生是多基因累积、多步骤、多阶段的过程，在不同的时期，可能涉及不同的基因和不同的变化形式。 如能在分子水平对肿瘤基因变化提供指标，则对肿瘤的个体化和预见性治疗具有指导意义，可以提高肿瘤的临床治疗效果 例如：90％胰腺癌、50％结肠癌、30％的非小细胞肺癌存在Ras基因的激活，对放疗具有抵抗性，若能从基因水平改变异常基因状态，则提高放疗敏感性。 六、原发性高血压的分子诊断 原发性高血压(essential hypetension，EH)是遗传与环境因素共同作用的结果。 遗传因素，即易感基因可能对高血压病的发生起决定性的作用。 目前已克隆并公布的高血压相关基因有血管紧张素原、血管紧张素转移酶、内皮素2、内皮型一氧化氮合成酶、心钠素家族基因等。 1．血管紧张素原基因 在目前已研究过原发性高血压候选基因中，血管紧张素原(ansiotensinogen，ATG)基因被认为是最有可能成为EH相关基因。 1）人ATG基因位于染色体1q42-43，该基因全长12kb，包含5个外显子，4个内含子。其中外显子2内存在一种分子变异，即核苷酸704处胸腺嘧啶被胞嘧啶代替后，编码产物第235号氨基酸由甲硫氨酸变异为苏氨酸，该分子变异与原发性高血压有关联。 2) 诊断方法 可采用PCR方法确定基因组DNA中GT基因第2外显子M235T分子变异，多聚酶链式正向引物及负向引物分别为5’-CCGTTTGTGCAGG GCCTGGCTCTCT-3‘和5’-CAGGGTGCTGTCCA CACTGGACCCC-3‘。 在ATG基因相应的蛋白产物中第235位Met突变为Thr后，收缩压、舒张压和血浆ATG浓度均显著提高，表明M235T与高血压相关。 2．血管紧张素转化酶基因 1）血管紧张素转移酶(ACE) 是参与体内血压调节的肾素血管紧张系统的关键酶，在高血压发病机制中具有重要作用。 2）人血管紧张素转化酶基因全长21kb，包含26个外显子，定位在染色体17q23，在16号内含子存在插入型或缺失型多态性，即该基因在16号内含子内存在着插入和缺失两种变异体。 3）该基因的插入和缺失可用PCR方法诊断。 上游引物：5‘-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3’， 下游引物： 5‘-ATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3’。 高血压候选基因多态性分析在EH中的临床意义 临床分型 靶器官损伤研究 个体化治疗 基因多态性与盐敏感性高血压 ?-内收素 血管紧张素转换酶 上皮钠通道 血管紧张素原 心钠素 ?2肾上腺素能受体 SA G蛋白亚单位3 ……… 基因多态性与高血压靶器官损伤 脑卒中 载脂蛋白E ?-纤维蛋白原 血管紧张素原 血管紧张素II的1型受体 内皮型一氧化氮合酶 心钠素 冠心病 副氧酶 凝血因子V 凝血因子VII 载脂蛋白B ACE基因多态性与高血压靶器官损伤 疾病 研究报告数 I D DD 冠心病 30 + 11 % + 32 % 心肌梗死 15 + 12 %