微生物培养技术 演示文稿.ppt

(一)微生物实验室培养 1．培养基 (1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)分类和应用 (3)培养基配方及营养要素 基本营养要素：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。 特别提醒：①微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。 ②对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源，又是氮源、能源。 ③有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合成，如大肠杆菌能合成某些维生素，作为特殊营养物质。 ④制备：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。 2. 无菌技术 (1)消毒和灭菌的区别 特别提醒：用酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好，原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。 (2)无菌技术主要操作要求 ①实验前应对操作空间、操作人员消毒，对所用器具和培养基灭菌。 ②实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作，另外要避免已灭菌处理材料再次污染。 3．微生物的分离方法 方法一：平板划线法、稀释涂布平板法、稀释混合平板法。 (1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其生长成单个的菌落，则这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 (2)目的：分离由一个细菌繁殖而来的菌落。 (3)菌落判断的依据：形状、大小、表面、边缘、隆起度、透明度、颜色等。 (4)实例；从酒曲中分离酵母菌。 方法二：选择培养基分离法。 (1)原理：使分离对象大量繁殖，抑制其他微生物的生长。 (2)适用范围：分离的微生物在混合样品中数量较少时。 (3)实例：分离分解纤维素的细菌。 (二)大肠杆菌分离与纯培养(以及菌种的保藏) (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 (2)纯化大肠杆菌 ①原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 ②方法：平板划线法、稀释涂布平板法。 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面；稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 (3)菌种的保藏 ①短期保存：固体斜面培养基上4℃保存，菌种易被污染或产生变异。 ②长期保存：－20℃甘油管在冷冻箱中保藏。 特别提醒：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的温度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 1．分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、 葡萄糖、尿素、琼脂。请回答： (1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是________和________。 (2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是(　　) ①化学消毒　②灼烧灭菌　③干热灭菌　④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌　⑥巴氏消毒法　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤ 解析：碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。绝大多数生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以这种培养基对微生物有选择作用。选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，可用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。 答案：(1)葡萄糖　尿素　(2)有选择作用。因为此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长　(3)A (一)原理：运用“选择培养基”(能让特定的被选择的微生物生长，抑制其他微生物生长，从而从混杂的微生物群体中分离出特定的微生物)从混杂微生物选择出特定微生物。 (二)案例一 —— 分解纤维素的微生物的分离 1．纤维素酶