临床微生物学病原性真菌检验参考.ppt

第二节病原性真菌检验 医学检验系临床微生物及免疫学教研室 井申荣 第一部分 病原性真菌概述 真菌（Fungus） 具有典型细胞结构（细胞核、细胞器、细胞壁） 细胞壁含几丁质和（或）纤维素 无根、茎、叶，不含叶绿素 以腐生或寄生方式摄取养料 能进行有性生殖和（或）无性繁殖 对人类致病的真菌分为： 浅部真菌：侵犯皮肤、毛发、指甲，为慢性，对 　　　　　　　治疗有顽固性，但影响身体较小， 深部真菌：可侵犯全身内脏，严重的可引起死亡。 　　此外有些真菌寄生于粮食、饲料、食品中，能产生毒素引起中毒性真菌病。 一、生物学性状（一）形态结构 真菌细胞结构比细菌复杂 细胞壁为几丁质(Chitin)（多聚N－乙酰葡萄糖组成），并含葡聚糖，甘露聚糖及蛋白质，某些酵母菌还含类脂体。 细胞内有较为典型的核结构和细胞器。 真菌形态分单细胞和多细胞两类 单细胞真菌主要为酵母和类酵母菌（如隐球菌、念珠菌），呈圆形或椭圆形。以出芽方式繁殖。 多细胞真菌由菌丝和孢子组成 菌丝分枝交织成团，形成菌丝体（Mycelium），并长有各种孢子，这类真菌即一般称为霉菌（Mold）。 由于生活环境（如营养、温度、氧气等）的改变，有些真菌的孢子与菌丝两种形态可以互变，这类真菌称为二相性真菌（dimorphic fungus），如球孢子菌、组织胞浆菌及芽生菌。 真菌孢子和细菌芽胞的区别 真菌的形态构成 真菌菌丝形态 真菌孢子形态 （二）培养特性 大多数真菌营养要求不高，常用沙保氏培养基 （SDA）培养。 浅部病原性真菌的最适温度为22～28℃，生长缓慢，大多于1～4周出现典型菌落。 深部病原性真菌培养在37℃中生长最好，生长较快，经3-4天即长出菌落。 真菌菌落类型 （三）变异性 真菌易发生变异，在人工培养基中多次传代或孵育过久，可出现形态结构、菌落性状、色素及毒力等改变。 （四）抵抗力 真菌对干燥、阳光、紫外线及一般化学消毒剂有一定的耐受力，但充分暴露于阳光，紫外线及干燥情况下大多数真菌可被杀死，且对2.5%碘酒，10%福尔马林都敏感，一般可用福尔马林薰蒸被真菌感染的房间。 对热敏感，一般60℃1小时可杀死真菌菌丝和孢子。 二、致病性与免疫性（一）致病性 真菌引起的疾病大致包括 真菌性感染：主要是外源性感染 浅部真菌侵犯皮肤、指甲及须发等组织，顽强繁殖，发生机械刺激损害，同时产生酶及酸等代谢产物，引起炎症反应和细胞病变。 深部真菌侵犯皮下，内脏及脑膜等处，引起慢性肉芽肿及坏死。 2．条件致病性真菌感染： 主要是内源性感染（如白色念珠菌），亦有外源性感染（如曲霉菌）。 3．过敏性真菌病： 由真菌性过敏原（如孢子抗原）引起过敏症，如哮喘，变态反 应性肺泡炎和癣菌疹等。 4．真菌毒素中毒症： 侵犯害肝、肾、脑、中枢神经系统及造血组织。如黄曲霉毒素、某些镰刀菌素和黑葡萄穗素。 （二）免疫性 1．非特异性免疫：人类对真菌感染有天然免疫力。皮肤分泌短链脂肪酸和乳酸、血液中转铁蛋白、中性粒细胞和单核巨噬细胞的吞噬作用，以及正常菌群的拮抗作用。 2．特异性免疫：真菌感染中细胞免疫是机体排菌杀菌及复原的关键，T细胞分泌的淋巴因子、以T细胞为主导的迟发型变态反应引起免疫病理损伤能局限和消灭真菌，以终止感染。 三、微生物学诊断（一）?? 直接检查 1．不染色标本的直接镜检： 直接采取标本制片、显微镜下直接观察，若发现真菌菌丝或孢子存在时，即可初步判定为真菌感染。 1）标本制备： 2）检查方法： 3）封固液： ①KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如毛发、指甲、鳞屑等）。 ②墨汁：主要用于检查有荚膜的真菌（如新型隐球菌等） 。 ③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。 ④生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替氢氧化钾溶液。 2．染色标本检查： 1）革兰氏染色： 各种真菌均为革兰氏阳性，为深蓝色。常用于酵母菌、白色念珠菌、孢子丝菌、诺卡菌及组织胞浆菌等。 2）乳酸酚棉蓝染色 3）糖原染色：菌体均染成红色。用于标本直接涂片及组织病理切片染色。 4）嗜银染色（GMS）：染成黑色。 5）粘蛋白卡红染色法（MCS）： 主要用于新型隐球菌荚膜的染色。隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核呈黑色。 6）荧光染色： 主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组织切片。 （二）培养检查 本法可确定菌种，辅助直接检查的不足； 通常用沙保氏培养基（SDA）（22～28℃）； 深部真菌可用血琼脂或脑心葡萄糖血琼脂37℃培养； （三）免疫