植物细胞工程第5讲 植物离体快速繁殖76.ppt

全球离体快繁的植物种类300多种。文献报道具快繁能力的植物已有1000多种。 商业性快繁植物 花卉 果树 观赏树木 经济树木（如桉树、杨树） 植物品种 由于多酚氧化酶活性上的差异，不同品种间的褐变现象是不同的。因此，在培养过程中应该有所选择，对不同的品种分别进行处理。 生理状态 由于外植体的生理状态不同，在接种后褐变程度也有所不同。一般来说，幼嫩的组织在接种后褐变程度不明显，而老熟的组织在接种后褐变程度较为严重。 培养基成分 浓度过高的无机盐会使某些观赏植物的褐变程度增加，此外，细胞分裂素的水平过高也会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性，从而使褐变现象加深。 培养条件不当 如果光照过强、温度过高、培养时间过长等，均可使多酚氧化酶的活性提高，从而加速被培养的外植体的褐变程度。 ①选择合适的外植体 一般来说，最好选择生长处于旺盛的外植体，这样可以使褐变现象明显减轻。 ②合适的培养条件 无机盐成分、植物生长物质水平、适宜温度、及时继代培养均可以减轻材料的褐变现象。 ③使用抗氧化剂或吸附物质 在培养基中，使用半胱氨酸、抗坏血酸等抗氧化剂能够较为有效地避免或减轻很多外植体的褐变现象。另外使用0.1％~0.5％的活性炭对防止褐变也有较为明显的效果。 ④连续转移 对容易褐变的材料可间隔12-24 h的培养后，再转移到新的培养基上，这样经过连续处理7-l0 d后，褐变现象便会得到控制或大为减轻。 解决玻璃化的方法 ①适当增加培养基中无机盐水平，以降低培养基的水势； ②适当增加IAA等生长素含量，降低BA等细胞分裂素含量，可以考虑加入适量脱落酸；促进木质部分化。 ③减少培养基中含氮化合物的用量；供氮形式减少铵态氮提高硝态氮；几时转移，避免氨积累。 ④适当添加间苯三酚、根皮苷、青霉素G钾、活性炭、聚乙烯醇，均可有效抑制玻璃化。 ⑤适当增加琼脂含量，降低水势。 细菌污染 培养基灭菌不过关 接种器具污染 操作污染 交叉污染 发酵状 水渍状 滴形云雾状 真菌污染 污染原因 培养室湿度过大 瓶口积落有灰尘和孢子 灰、白、黄、绿菌丝体、孢子组成绒毛状物有色圈 材料内部带菌 外植体接触培养基部位长菌 外植体损伤部位长菌 外植体生长不良或表现出缺绿 检测 培养基添加有机物检测 防止污染的措施 植物材料选择 严格消毒灭菌 合理安排繁殖程序 规范操作 控制环境条件 外植体褐变是指在接种后，其表面开始褐变，有时甚至会使整个培养基褐变的现象。 由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，而使细胞的代谢发生变化所致。在褐变过程中，会产生醌类物质，它们多呈棕褐色，当扩散到培养基后，就会抑制其他酶的活性，从而影响所接种外植体的培养。 * * 5.2 外植体褐变（原代培养） 褐变 褐变原因 防止、减轻褐变措施 5.2 继代培养中材料的玻璃化现象 玻璃化 当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水迹状。 玻璃化会使试管苗生长缓慢、繁殖系数有所下降。 玻璃化为试管苗的生理失调症。玻璃化苗茎、叶表面无蜡质，体内极性化合物水平较高，细胞持水力差，植株蒸腾作用强，无法进行正常移栽。 * * 不同种类品种间试管苗的玻璃化程度有差异。 当培养基细胞分裂素水平较高时易出现玻璃化现象。 培养容器中空气湿度过高，透气性较差时易出现玻璃化现象。 * * 玻璃化苗产生原因 培养基措施 培养环境措施 ⑥增加容器通风，进行CO2施肥，有明显的抑制作用。 ⑦延长光照时间，提高光照强度，增加自然光。 ⑧降低培养温度，进行变温培养，有助于减轻试管苗玻璃化现象 培养阶段易出现的其他问题 白化苗 THANK YOU THE END ①根的生理功能低 ，吸水能力弱 ②叶片表面极易散失水分 ③气孔不能关闭 ④叶光合能力较低，二氧化碳固定能力差。 试管苗生理功能特点 为什么炼苗？ 炼苗延续时间 1周左右。 原则 逐步改变环境，逐步适应。 炼苗 炼苗时机 生根培养3-4周左右。 方法 将培养物不开口移到温室，适当遮光，1~2天；然后开盖，温度由20℃左右的较稳定逐步转变接近自然变温，光照逐步转变接近自然光照。湿度逐步转变接近自然。锻炼4~5天。 练苗 判断 试管苗变得壮实，茎叶颜色加深，根系由黄白色转为黄褐色。 试管苗在大棚内的炼苗 场所 选好定植场所和基质 基质 要求 疏松、透水、通气。 原料 以蛭石、珍珠岩、细沙、草炭、疏松沃土等混合基质。 处理 高温消毒，或用0.3%硫酸铜溶液均匀喷洒土壤。 温室或塑料大棚。通风良好，灌溉方便，光照充足 基质配比 珍珠岩